MrZD9C5
我跑的27分子量的条带,刚开始显影50多秒就出来了,条带很虚,背景很干净和白板一样,我觉得其他转膜抗体关系不大,之前一样的条件就能出,我抱着再显几次的心态去试,条带显出来了,就是时间久,一个条带300秒左右,趋势也挺好,就是背景脏,这是啥现象啊,玄学
loveliufudan
可能是由于几种原因引起的:
蛋白质表达量过低:如果您的样品中的蛋白质表达量很低,显影出的条带就可能很弱。这可能会导致您需要更长时间的曝光才能获得足够的信号。您可以尝试增加样品的加载量来解决这个问题。
酶标记的抗体活性下降:如果您使用的抗体活性下降,也可能导致显影后的条带较虚弱。确保您使用的抗体存储在适当的条件下,并且没有过期。如果您在显影前准备了较长时间,也可能会影响抗体的活性。尽量减少抗体的预先混合时间可以帮助减少这种影响。
显影缓冲液浓度或pH值问题:如果您使用的显影缓冲液过于稀释或过于浓缩,或者pH值不正确,也可能导致显影效果不佳。确保您按照厂家指示准确配制显影缓冲液,并使用新鲜的显影液。
均一性问题:如果您在膜的某个区域加载了过多的样品,或者加载不均匀,这可能会导致某些区域的显影效果较差。确保您的样品加载均匀,并且不要在同一区域重复加载。
背景污染:如果您的背景比较脏,可能是由于过多的次级抗体或其它非特异性结合引起的。您可以尝试增加洗涤步骤,或更换次级抗体来减少非特异性结合。
sswei
原因有好多,需要一一排除:
1,蛋白量太少,或者目的蛋白少
2,转膜没转上或者转过了
3,抗体浓度不够,或者特异性不强
4,显影液选用超敏显影液。
毛利小五郎的徒弟
排除抗体的原因就是你孵育时间太长了,减少孵育时间
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