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为什么做WB实验时目的蛋白位点会严重偏移,例如36位点的Gapdh有时会在30左右的位点?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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dxy_7d4tlk84

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3 个回答

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相似又互补

有帮助

会不会你用的marker不行,换一个别的品牌marker试试看

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loveliufudan

有帮助

在WB实验中,目的蛋白位点偏移的原因可能有多种:

蛋白质迁移不均匀:如果电泳迁移不均匀,导致蛋白质在膜上分布不均匀,那么目的蛋白位点可能会偏移。

抗体结合位置的不确定性:抗体结合目标蛋白的位置可能存在不确定性,这可能导致检测到的蛋白位点位置偏移。

蛋白质降解:如果目的蛋白质在电泳和转移的过程中发生降解,那么它的分子量就会发生变化,导致蛋白位点位置偏移。

膜上印迹的质量:如果膜的质量不佳,比如膜上存在气泡或污渍,这可能会影响目的蛋白的分布,导致蛋白位点位置偏移。

总的来说,要解决目的蛋白位点偏移的问题,可以从以下几个方面入手:

控制电泳条件,确保蛋白质在电泳过程中均匀迁移。

优化抗体结合条件,确保抗体能够特异性结合目的蛋白质。

加强膜上印迹的质量控制,确保膜的质量良好。

根据实验结果进行优化,根据实验结果来确定是否需要调整实验步骤或条件。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

有时候会有类似结构的位点进行干扰,看起来像是偏移

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