求助，WB曝光出来整张膜都是黑色，同样条件的内参就还能看

一抗和二抗浓度降低，TBST多洗几遍看看是否改善

是不是封闭时间不够，或者膜有问题

背景的问题常见就是抗体、膜、试剂污染这些方面，如果你排除了抗体和封闭的问题，还可以把你用的PVDF膜换成NC膜，用新配的缓冲液，增加漂洗时间，减少曝光时间等等。可能屎你封闭不彻底。也可能是你TBST/PBST洗膜不完全。

全黑要么是蛋白量低曝光不出来，要么是一抗不行或者是转膜有问题。看你的内参，应该是跑胶、转膜都有问题。

应该是曝光的参数设置问题，可以试着自动发一下看看，不行就一点点摸索曝光条件。条带不一样参数肯定要变的。

有可能是抗体的原因，建议换抗体试试