litorch
最近新提WB蛋白,BCA法测蛋白浓度都在100-200ug/ml,裂解液加了200ul,请教各位高手这么低的蛋白浓度还能跑出条带吗?如果做WB有什么注意事项吗?实验新手望大家多指教!谢谢
麻黄连翘赤小豆
可以上样量递增这样跑一块胶试试,有时候浓度低也可以跑出条带,不是只看蛋白浓度,也看上样量
bamboopiggy
下次裂细胞,少加点裂解液,一般wb上样20-40ug就够了。你这次的蛋白可以试试用大梳子齿的,增加上样量试试。wb,估计要看你踩到什么坑里,一步一步的解决了。各种小细节太多,包括仪器,液体,样品,膜,等等的
府宅
5XSDS上样缓冲液,这样蛋白样品和缓冲液比例是4:1;还有就是煮沸蛋白变性的时候可以适当打开EP管盖,让水分挥发点,WB还是比较灵敏的
dxy_gwrp7ndq
有一种小型的超滤管(密理博),可以处理500μl到1ml的样品,离心后可以达到浓缩的效果;另外,如果蛋白浓度低,可以做厚一点的胶
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