丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册

WB提蛋白浓度偏低怎么办呢?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

user-title

litorch

最近新提WB蛋白,BCA法测蛋白浓度都在100-200ug/ml,裂解液加了200ul,请教各位高手这么低的蛋白浓度还能跑出条带吗?如果做WB有什么注意事项吗?实验新手望大家多指教!谢谢

wx-share
分享

4 个回答

user-title

麻黄连翘赤小豆

有帮助

可以上样量递增这样跑一块胶试试,有时候浓度低也可以跑出条带,不是只看蛋白浓度,也看上样量

user-title

bamboopiggy

有帮助

下次裂细胞,少加点裂解液,一般wb上样20-40ug就够了。你这次的蛋白可以试试用大梳子齿的,增加上样量试试。wb,估计要看你踩到什么坑里,一步一步的解决了。各种小细节太多,包括仪器,液体,样品,膜,等等的

user-title

府宅

有帮助

5XSDS上样缓冲液,这样蛋白样品和缓冲液比例是4:1;还有就是煮沸蛋白变性的时候可以适当打开EP管盖,让水分挥发点,WB还是比较灵敏的

user-title

dxy_gwrp7ndq

有帮助

有一种小型的超滤管(密理博),可以处理500μl到1ml的样品,离心后可以达到浓缩的效果;另外,如果蛋白浓度低,可以做厚一点的胶

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序