蛋白不进胶

相关实验：蛋白质免疫印迹(Western Blot，WB)

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dxy_3yf5w2e9

2022-07-22

最近在做WB，提的核蛋白，加入5✖️SDS loading buffer 98℃ 15min变性，上样，5％浓缩胶，12％分离胶，100V 20min后换成125V跑1h 25min,跑完后做银染，发现蛋白都还在点样孔那，完全跑不进胶，所有的蛋白样品，Tris缓冲我，都换过了还是跑不进去，请问这是什么原因啊！急！谢谢各位！！！

5 个回答

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bamboopiggy

2022-07-22

有帮助

是不是你的lysis 坏了，或者是5xSDS的SDS坏了，导致蛋白没有裂解开？

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Eason老歌迷

2022-07-22

有帮助

是不是你的tirs—cl ph值不对啊，或者是你忘记加sds了。

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whilt-shirt

2022-07-22

有帮助

有可能是核蛋白提取试剂盒的原因，建议更换试剂盒试试

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申东熙老伯

2022-07-22

有帮助

处理蛋白样品的时候光98℃加热不够，最好先超声破碎一下再加热。

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丁香清香

2022-07-22

有帮助

蛋白胶样品在点样孔处堆积有很多原因
其中最可能的是蛋白样品并未有完全溶解，可能形成了胶束状的沉淀
可以在加完上样缓冲液后高速离心，离心后吸出上清再点样

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