甜美美大宝子
最近跑wb,βactin跑的还不错,我的目的蛋白,目的蛋白分子量28kda,转膜35min,跑不出来而且背景乱糟糟的,请问大家是怎么回事呀?
inventbiotech
内参最好根据目标蛋白所在细胞亚结构的位置进行选择。胞质内参很容易检出,但是目标蛋白位于胞核或者细胞器,细胞膜上检出就有困难,因为一时丰度低,普通蛋白提取会发生丢失,检测不到或者很弱就很正常了。可以试一下柱式法总蛋白提取方法,可以无差别提取细胞所有蛋白。这样就可以解决因蛋白丢失检测不出来的问题。
天一湖医者
抗体的效果会不会不够?抗体不好的话的确很难出。
秋秋欣欣
先确定你这个样品的目的是不是也在这个位置,然后确认抗体是不是没问题
whilt-shirt
有可能是没转上或者一抗不行,建议更换一抗试试
bamboopiggy
首先要确定你的抗体好使,有阳参么?或者你可以试试孵育一个全膜,看看你的目的条带具体出在什么地方。
Eason老歌迷
内参还行看着,目的蛋白看不到可能是因为 ,一是你的抗体没有选择好,二是你转膜没有转上,三是你剪膜时候把条带剪掉了,四是你显影曝光没操作好。
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