MeJxy
我的WB,它出了什么问题
分子量:160kb
膜:0.45
胶:8%
电泳:60V浓缩胶+110V分离胶跑到底
转膜:300mA,150min
封闭:5%奶粉室温摇床1.5h
一抗:4℃摇床12h
洗膜:10miundefined3次
二抗:室温摇床1.5h
洗膜:10miundefined3次
显影:A:B=1:1,曝光时间1min
balalaLy
转膜转够3小时吧,转膜液中甲醇的浓度可以调低点
Eason老歌迷
有几个问题,就是大分子蛋白本来就不太好转,可以适当延长转膜时间,这个需要你自己多做几次把握。第二个是现在夏天了,孵二抗时间短点!封闭液你要确保没有小颗粒,小沉淀。
天一湖医者
膜上其他部位与一抗或二抗非特异性结合,配置的封闭液可能没有完全溶解,使不容颗粒附着在膜上从而导致发光时候膜上形成黑点。
配置封闭液后最好静止一下,封闭牛奶一定要纯,封闭结束之前要清洗三遍之后再加一抗。
抗体与封闭试剂反应。
使用前过滤封闭试剂。
HRP 偶联二抗中有聚集体。
过滤二抗试剂,去除聚集体。