WB两张膜，为什么差别这么大

那应该是你转膜过程中的问题，膜也是一样的吗？

感觉是你第二张膜的蛋白降解了，所以才出那么多杂带

都是一样操作的吗？胶也是一起配的吗？感觉你这个是孵抗体的问题。

可能是操作过程中有问题（可能原因是（1）、你结合底物会不会有问题，即没有充分结合好，或者结合时间太短，（2）、你要确定两张膜都是用新的底物反应液，（3）、就是没有信号的膜会不会压片时间太短，如果使用仪器扫片就不存在这种问题，）所以原因比较多，你只能逐一排查。