Eason老歌迷
是一张膜上的吗?如果不是那就可能是哪一步没做好。我看有点像是孵抗体的问题。你一抗二抗怎么孵的
bamboopiggy
你第一个条带的蛋白质降解了,第二可以
天一湖医者
那这个因素可就多了,首先你确定你的细胞表达你想要的目标蛋白,其次你的抗体别人之前做出来过说明抗体没问题,最有可能的还是你的样品。
秋秋欣欣
看你第一张图 ,结果拖尾严重应该是你的胶浓度过大或者没凝好
汤姆卜丽波
像第一张那个就是非特异性结合有点多,可能 一抗浓度有点高,降低一抗稀释比,可以去掉杂带;或者适当加长封闭时间;多洗几次膜
府宅
首先你跑完电泳了 可以用考马染个胶看看 以证明你提的蛋白没有问题
然后转完摸后 用立春红染色 以证明蛋白是否从胶上成功转到摸上了
如果这些没有问题 那以后电泳 转摸的条件就不要变了
摸摸一抗 二抗的浓度 首先还是从抗体的做小稀释比做 即从大浓度开始做
尽管会出现非特异性条带 最起码条带出来了 然后再已不同的抗体稀释比做
背景深了 可以加大封闭液的浓度和时间
dxy_gwrp7ndq
试试加大一抗浓度(可能会导致非特异条带增加)。或者做个斑点印迹(不用电泳和转膜,直接把蛋白样品点在膜上),找出比较合适的一抗和二抗浓度,也能试出比较合适的上样量。
相关产品推荐