WB结果分析

是一张膜上的吗？如果不是那就可能是哪一步没做好。我看有点像是孵抗体的问题。你一抗二抗怎么孵的

你第一个条带的蛋白质降解了，第二可以

那这个因素可就多了，首先你确定你的细胞表达你想要的目标蛋白，其次你的抗体别人之前做出来过说明抗体没问题，最有可能的还是你的样品。

看你第一张图 ，结果拖尾严重应该是你的胶浓度过大或者没凝好

像第一张那个就是非特异性结合有点多，可能 一抗浓度有点高，降低一抗稀释比，可以去掉杂带；或者适当加长封闭时间；多洗几次膜

首先你跑完电泳了 可以用考马染个胶看看 以证明你提的蛋白没有问题

然后转完摸后 用立春红染色 以证明蛋白是否从胶上成功转到摸上了

如果这些没有问题 那以后电泳 转摸的条件就不要变了

摸摸一抗 二抗的浓度 首先还是从抗体的做小稀释比做 即从大浓度开始做

尽管会出现非特异性条带 最起码条带出来了 然后再已不同的抗体稀释比做

背景深了 可以加大封闭液的浓度和时间

试试加大一抗浓度（可能会导致非特异条带增加）。或者做个斑点印迹（不用电泳和转膜，直接把蛋白样品点在膜上），找出比较合适的一抗和二抗浓度，也能试出比较合适的上样量。