府宅
BSA成分单一,是常用的封闭试剂,二抗稀释液中不含有BSA或者脱脂奶粉血清等,可能会导致二抗与之结合,降低二抗的结合力。
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可以用BSA代替,因为奶粉含有酪蛋白(一种磷蛋白),如果用奶粉,有可能出现背景深的现象。 这就取决于抗体的质量了。
二豆sai
脱脂奶粉是为了封闭,结合在膜表面的空白间隙,防止一抗非特异性结合,可以用BSA代替。
未来9
虽然可以用BSA代替,但做WB一般很少用BSA封闭,5%的脱脂牛奶含有的蛋白比较全面,封闭比较完全,非特异性结合少
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蛋白质封闭非特异性位点的作用,可以用bsa替代
天一湖医者
用奶粉是为了封闭转移膜,pvdf膜与所有蛋白是有很强的结合力,包括抗体,蛋白电泳转膜后,pvdf膜上会结合分离的蛋白,但这些蛋白的数量比较少,不足以饱和膜上所有的蛋白结合位点,如果不封闭直接孵育抗体,抗体就会与这些位点结合,所以需要用杂蛋白封闭膜上的空余位点。封闭相当于在膜上覆盖一层蛋白,这样抗体与膜本身之间就没有结合力了,只会与膜上特异性的蛋白结合,从而实现特异性的免疫识别。
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