做细胞的过表达时，片段设计的最佳长度是多少？

这个取决于你的实验目的，看你要过表达的蛋白有多长啊，如果你问的是primer的长度，那至少要保证有15个以上的片段加酶切位点，加保护碱基，大概有25-30bp吧

一般引物长度在18到30个之间，最少要18个完全互补配对的碱基，这样与人体30万个碱基对完全互补的几率只有一次，以保证其特异性。常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过 长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA聚合酶进行反应。

引物长度大概在20-24bp范围是比较好的