WB条带有点宽呢，呜呜呜

是蛋白没有分开？蛋白没有分开，可以考虑延长电泳时间，或是使用更大的胶，或是做浓度梯度的胶

还是蛋白拖带？蛋白拖带，考虑先纯化蛋白，用高浓度胶进行电泳，电泳槽在电泳过程中放在冰水，保持低温，转膜过程也放在冰水中进行，防止降解。希望对你有帮助。

减少样本的上样量，也许条带不会那么宽了

大概可能有三个原因。

1.电泳缓冲液用的次数过多，一般来说电泳缓冲液用过两次以后电泳的效果就会变差。2.电泳的浓缩胶和分离胶缓冲液的PH没有调好或浓度没有调好。浓缩胶和分离胶胶浓度的变化和PH的变化让电泳样品压缩在一起。一般情况下浓缩胶缓冲液(Tris—HCl，pH6.8)、分离胶缓冲液(Tri s—HCl， pH8.8)。3.提取的粗蛋白样品里面有杂质，细胞里面除了含有蛋白质还有核酸、多糖、纤维素等大分子，这些大分子浓度较高时会使样品黏连，造成条带跑的不够整齐。

如果你是从胞浆里提取的粗蛋白，怀疑可能是核酸或多糖过多造成的样品黏连，建议12000转离心3min，去除底部杂质，取上清液跑电泳试试。

宽没事啊，只要趋势对就好，或者你别用10孔胶，用15孔胶。

蛋白量太大，一抗浓度和时间太长。

解决办法：根据情况调整蛋白量，同时一抗浓度和时间也可以缩短。

弥散的太宽，也可能是胶没有完全凝固，建议配胶时注意Tris-HCL的PH值，对蛋白条带的影响很大。APS要保证新鲜没有过期，一般在-20℃储存，在4℃条件下保存不超过一周，APS过期会导致蛋白胶不能完全凝，就导致指示剂和目的条带弥散

WB实验要根据目的条带的大小选择合适浓度的胶，胶的浓度越低，指示剂和蛋白就能跑的越分散，看起来就相对宽一点。

可能是加样量过多，弥散至孔周围了，减少上样量或者使用5X上样缓冲液。