如何确定WB结果中目的蛋白位置高于预测位置的原因

可以通过更换不同的marker来确定

第一：确认marker指示准确无误；

第二：抗体特异性识别没问题；

第三：前面没问题的话，可能原因： 修饰（很大的糖蛋白等大分子的修饰）、较强的多聚体（二聚体）（非共价或者二硫键共价），较强的蛋白相互作用（结合其他蛋白，结合非常强的那种）

建议：裂解液中加DTT(二硫苏糖醇，解开二硫键)、强变性剂（高浓度Urea等变性剂）、变性SDS-PAGE电泳。

只能取了你的条带去做质谱，看是什么修饰了。一般差的不多是磷酸化。差的多是糖基化。

其实SDS-PAGE电泳时分子量marker不能作为绝对标准，只是一个参考值。如果差的不多其实没问题的

1. 样品不纯，预测位置确实有目标蛋白，但是最亮的位置的杂蛋白更多，毕竟抗体并不保证特异，所以对照非常重要2. 蛋白被修饰了或者剪切了分子大小变了或者迁移速度变了