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蛋白不表达或表达量很低,怎样快速选择最合适的表达载体?

相关实验:选择重组蛋白表达的合适方法

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羽2BRD

如上。

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4 个回答

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天一湖医者

有帮助

根据你的实验目的确定你所需要的表达量,是采用一个含有强启动子的载体来过量表达蛋白,还是只需要一个普通的启动子即可。

根据上述原则初选出一些载体,然后找到这些载体的使用说明书(直接在网上找),里面有非常详细的说明,包括启动子信息、多克隆位点信息、载体使用范围、表达条件等。

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dxy_gwrp7ndq

有帮助

对细胞有毒性的蛋白,建议选用背景表达低、严谨调控诱导的菌株,如BL21(DE3) pLysS菌株。

对于带有稀有密码子的蛋白或来源于真核基因的蛋白,建议选用Transetta(DE3) 等菌株。

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万千490

有帮助

试不同的表达载体与菌株

不同的蛋白,对不同载体与菌株的偏好不同,如果某一表达蛋白无法通过优化诱导表达条件得到明显改善,可以更换其他菌株或表达载体。

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whilt-shirt

有帮助

T7启动子的载体(如pET系列载体)应选用BL21DE3),BL21DE3 pLysSTransettaDE3)等菌株。非T7启动子的表达载体(如Tac启动子的pGEXpMAL系列表达载体)应选用BL21表达菌株。 r>

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