蛋白质不表达，蛋白表达量低的原因？

蛋白不表达就说明他的转录和翻译，这个过程出现了问题。表达量低说明他这个合成蛋白质的效率是很低的，可能在盘旋折叠最后一个部分出现了问题。

在表达蛋白的时候，细胞状态非常重要，往往决定了你的蛋白表达量，所以保证细胞状态良好很重要。另外，提高蛋白质产量的一个经典方法是在更高的细胞密度下生产蛋白质。这就要求你的细胞数量要达到一定标准，选用好一点的培养基也能够帮助细胞生长从而提高蛋白表达。

当然，表达纯化蛋白是一项比较考验技术的工作。不管是质粒浓度、细胞状态、使用的机器和操作手法都能直接影响到蛋白纯化结果。

1.载体构建错误。这个屡见不鲜，很多克隆新人经常弄错读码框。比如Qiagen的pQE系列载体，其克隆位点常有一两个碱基的区别;另外有些酶产生粘端有些酶产生平端，这些都容易导致读码框错误，从而表达不出来。

2.宿主菌选择不当。不同的宿主菌其基因型是不一样的。有些经过特殊修饰的载体，或者特殊用途的载体，或者有特殊启动子的载体，必须选择合适的宿主菌进行表达。

3.密码子的使用频率低。有些基因其本身含有许多稀有密码子，尤其是起始密码之后的15个碱基之内的稀有密码子，对蛋白表达有着很重要的影响。优化密码子对原核表达似乎效果很好，对真核表达系统未见得有很好的效果。

4、质粒不稳定或者质粒丢失。pET系统通常比较稳定。但是你选用带氨苄青霉素抗性的载体时，也许有可能产生β-lactamase降解了抗生素，使质粒丢失。还有一种情况是表达重组的毒素蛋白，对宿主细胞也有毒性，造成质粒丢失。这种情况多见于真核表达系统。

5、蛋白酶将蛋白降解了。

6、二级翻译起始位点。这种情况见于你的序列里正好含有和核糖体结合位点完全一致的序列。那就怪不得人家了，核糖体会很高兴地找到这个位点，然后开始翻译，致使你的蛋白被截短，在电泳时看不到预期大小的片段。

7、SD序列。

8、 mRNA的二级结构。在克隆之前，你得看看你的序列里是否有和核糖体结合位点和/或翻译起始位点互补的序列。如然，你最好进行同义密码子替换。否则由此形成的mRNA二级结构，会让翻译嘎然而止的。

9、意外终止。这种情况见于PCR扩增序列时，会和你开个不大不小的玩笑。比如它会将序列中间TAC突变为TAA，让你的蛋白翻译刹车。所以在进行表达之前，一定要进行测序，避免这种情况的发生。

10、转录终止子。转录终止子的存在可以促进蛋白表达;但是缺少时就会造成“通读”，没完没了地读下去。这在pET系统里不成问题，因为它在靶基因的相反方向有个选择性的标记基因。如果你的靶基因正好和这个标记基因方向一致，那么你得看看你的靶基因后是否有个转录终止子。如果没有的话，它们会竞争得天昏地暗，抢着生成mRNA和蛋白质。

11、 mRNA的不稳定性。

12、检测方法的可行性。