同一个蛋白（带his-tag），分别用his和其特异性抗体去免疫，WB结果，his的正常，另外一个什么也没有（同一个人同时进行）

WB或者anti-his的抗体检查His是否表达；从上游构建入手，改变His-tag的位置（C-terminal or N-terminal），必要时增加His个数（常用6-10个）

建议重新制备样本，重新开始实验

1.你的蛋白可能因为加了his-tag而发生了构象改变，所以抗体detect不到你的蛋白了。

2.抗体不好用，有没有同时做个一定可以做出来的阳参？