天一湖医者
1、尽量在相对密封和无菌的环境下快速进行分离操作
2、在生理温度和压力范围内完成分离纯化操
3、慎用溶剂和酸、碱、盐类,使用前要进行详细的试验,确定最佳添加量和条件;
4、钝化或抑制蛋白质分解酶类的活性;
5、选择合适分离方法。如:凝胶过滤、离子交换、吸附层析、亲和层析、电泳、结晶等。
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不带电荷的氨基酸,如甘氨酸和丙氨酸,也可以作为蛋白的稳定剂使用,通常的工作浓度是20-500mM,常使用的还有GABA,TMAO;
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一些底物、辅助因子或者竞争性抑制剂也可以提高目的蛋白的稳定性;因为它们可以促使蛋白采取一些更紧密的折叠形式,从而减少unfoled区域,避免聚集
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1. 小分子诸如甘油和蔗糖可以促进蛋白的稳定性,但是需要注意这些小分子对目的蛋白的活性是否有影响,例如蔗糖和PEG对转化酶有很好的稳定促溶作用,但是对溶菌酶却是一种变性剂。2. 盐离子可以明显提高蛋白的溶解性。