转膜后蛋白异常的原因？
丁香实验
蛋白在电泳前除部分条带有弥散外，大体正常，电泳后转膜立春红染色显示变为弥散的大斑点，转膜后胶染色显示蛋白弥散开来，但是转膜后marker完全正常，已经尝试多次，不知道是由于什么原因造成？
SDS染色
转膜后立春红染色
转膜后剩余胶考马斯亮蓝染色
分享
31 个回答
是小杨同学
有帮助
我觉得可能是电压有点高，导致蛋白质降解了，然后可以换个电转仪器试试看
lzy必有我师
有帮助
换一个电转化仪，1.蛋白质是否降解；2.转膜时电压或者电流是否过大，或是没有降温，导致蛋白质变性；3.转膜液是否污染
dxyhsx123
有帮助
首先内参完好，说明操作没问题，目的蛋白出现问题，主要可能是蛋白的结构变化或者降解。
内科小护士
有帮助
膜的质量，生产批次，是否有甲醛处理过，转膜buffer是否新鲜呢， 转膜夹子是不是有较大空隙，或者滤纸是否新的，电压电流是否不稳。
dxy_pggo2lp2
有帮助
1.可能是蛋白质的变性出问题，建议检查金属浴的温度
2.新配置电泳液，混匀后再使用
3.gel的选择，检查gel的浓度是否合适
JCorona
有帮助
可能的原因：1.蛋白质降解；2.转膜时电压或者电流过大，或是没有降温，导致蛋白质变性；3.转膜液污染
医往情深丁香园
有帮助
可以考虑换个电转仪器。另外你转膜前如果也不是非常好。也建议好好优化条件找找原因，是不是问题出在电泳上。
dxy_qkedgrg7
有帮助
跑电泳时是正常的，但转膜后就不正常了，应该是转膜过程中出现了问题，可能是电压太高导致转膜温度过高是蛋白降解，转膜的时候温度比较高，最好放个冰盒在四度里转
vae1476
有帮助
电泳过程应该就出现问题了，需要重新做胶试一下，
dxy_bq4uxnd
有帮助
这个SDS-PAGE电用完就有异常，10kda附近蛋白拖影极其严重，整个泳道都存在拖影，应该是蛋白变性阶段出了问题，蛋白marker没有问题，所以蛋白胶应该没有问题。
ZZDX-YILILI
有帮助
1.蛋白质很可能被降解了，你确定下你转膜时候的电压电流是否过大或者温度是否过高导致转膜过程在蛋白质变性。
2.如果电泳时条带相对正常，转膜后弥散，你看看你的转膜缓冲液是不是用的时间长了。
一支肾上腺素
有帮助
可能是封闭时间不足导致的，这一点似乎多数人都不重视，所以有时候会有些意外，我一般室温2－4h，但4度过夜确实是最好的，另外在平皿中摇似乎比封口膜更容易掌握并获得好的效果。
小暮
有帮助
内参正常，胶和膜的问题不考虑，是不是抗体特异性识别不够
水深先试浅
有帮助
你可以尝试一下上层胶多制点，让蛋白多浓缩一会，然后小电压80v跑全程，看看效果
dxy_h7vcp8v3
有帮助
蛋白跑胶出现弥散，其一可能是蛋白胶制备有问题，检查蛋白胶是否制备正确，可以选择让别人带一个自己的样品，排除是否是自己制备错误的原因；其二，跑电泳时，电压过大。浓缩胶制备太短，或者未等蛋白样品跑进分离胶就急于调电压；其三，检查跑胶缓冲液是否正确。。在蛋白胶跑好样品检查无误之后，在去进行后续实验。。后续染色出现的问题，可能是蛋白条带没跑好，所以后续实验也没能得到期望结果
dxywode
有帮助
过高的蛋白上样量或一抗和二抗浓度过高都会促使底物过快的消耗，导致我们在做化学发光检测时，发光底物已经消耗殆尽而形成空斑。
dxy_pni5ki46
有帮助
第一次见到这样子的考染结果只能推测一下，看形状是转膜夹子的上的孔，猜测是否是没有用海绵直接夹上了没有空间给缓冲液浸润只在有孔的位置有电流通过，所以只有夹子上的孔的位置转过去了，其他位置的蛋白会向孔的位置聚集
dxy_w4oj7yoe
有帮助
首先你考染的胶感觉就已经有一点点弥散了，不过也不至于转膜之后那样。可能是转膜电压过高或温度过热？可以尝试低电压低温转膜过夜（在冰上或在冷室里）
dxy_4uyyu09r
有帮助
怀疑你电转液有问题加了什么离子，或者电转的其他器材不干净也可有能电流不稳定的原因。还有电泳后的条带这个也不够清晰，也可以再从这方面找找原因。
jey1235
有帮助
看SDS-PAGE 胶没有问题。转膜这一步中出现的问题。其实你仔细看这些胡乱的痕迹是有规律的，应该和你夹子的最外层是吻合的。针对这个现象有以下建议：
膜的质量，生产批次，是否有甲醛处理？
转膜buffer是否新鲜？
转膜夹子是不是有较大空隙，或者滤纸是否新裁的？
电压电流是否出现跳动？
第三张图的marker实际上看起来也不正常。整体转膜就是失败的，建议换一套体系尝试一下，只用更换转膜这一步骤。
提问
扫一扫
实验小助手
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序