wb一抗和二抗去除液的原理是什么？

相关实验：蛋白质免疫印迹(Western Blot，WB)

丁香实验

2022-01-12

百度等都找不到说明，一抗二抗去除液为何效果都很不稳定？经常洗完后没有条带，是漂洗时间没把握好吗？有无解决办法，因本人实验需要反复测量同一张膜上临近的几个条带。

31 个回答

小布丁瑶瑶

2022-01-20

有帮助

可以试着用一下膜再生液，等洗好后，再曝光看下还有没有条带，没有就可以孵育新抗体了

dxyhsx123

2022-01-20

有帮助

主要原理就是表面活性剂，强离子和ph值。不建议反复清洗孵育，建议同时跑多块胶进行验证。

dxy_pggo2lp2

2022-01-19

有帮助

我们组用的是碧云天的去除液。用的时候没有稀释。我用的是PVDF膜，我同学用的是NC膜，都试过。只能去除一次，第二次再用的时候就显不出来了。去除液的原理：强碱将蛋白质之间的键断开。

一支肾上腺素

2022-01-18

有帮助

一抗二抗去除液既要足够强烈而有效解离结合的抗体，也要足够温和使转移的目标蛋白仍能完整地留在 NC 膜或 PVDF 膜上。通过使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一次 SDS-PAGE 胶相比，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。

内科小护士

2022-01-18

有帮助

通过使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一次 SDS-PAGE 胶相比，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强

兔子爱吃鱼

2022-01-18

有帮助

原理不太清楚，没有遇到过你这个情况，我是用了抗体剥离液以后，还是能检测到原来的条带，可能是条件没摸好，感觉用处不大

dxy_rlratyf3

2022-01-18

有帮助

只要有漂洗就会一定程度上损失你的样品，现在市面上的漂洗液也就是一次损失多少的区别，最简单的话你可以缩短一下漂洗的时间，或者麻烦一点换个牌子的漂洗液，漂洗的一般操作就是先蒸馏水漂洗五分钟再换去除液摇床漂洗十分钟，最后用PBS摇床漂洗三四次就好。

是小杨同学

2022-01-18

有帮助

有可能是漂洗时间有些长呢，可以漂洗后先检验一下蛋白质的量和去除液有无剩余

lzy必有我师

2022-01-18

有帮助

抗体剥离液主要是解除了蛋白和一抗二抗的结合，通常是依赖表面活性剂，酸碱性，盐离子强度，还原剂等。所以剥离效果实际上与蛋白的性质也有关。

隔壁家的小夜猫子

2022-01-18

有帮助

变性啊，SDS，吐温，贝塔巯基乙醇，stripping的时间挺难控制的，而且非常挑抗体，建议先抗不好抗的，stripping之后抗内参啥的，当然最好还是再跑一块胶

JCorona

2022-01-18

有帮助

原理：在酸性条件下破坏抗原抗体间的结合力，包括静电引力、范登华引力、氢键结合力、疏水作用力等。洗完后没有条带可能是洗脱时间过长，有可能本身膜上蛋白含量较低，因为洗脱液每次洗脱都会不可避免地洗掉一部分膜上蛋白。

ZZDX-YILILI

2022-01-18

有帮助

1.首先很可能是你用去除液的漂洗时间没有把握好。很可能是因为时间太长，导致膜上的蛋白质丢失了。所以试试适当缩短下漂洗时间。 2.可以根据膜上蛋白质分子量不同设置不同漂洗时间试试。例如内参等表达量高的蛋白延长漂洗时间，表达量低的缩短漂洗时间。

水深先试浅

2022-01-17

有帮助

原理不是很懂，但我们实验室都是摸索时间，可以洗完之后再用显影液去验证下有没有清除

verbalkint

2022-01-17

有帮助

最好不要用去除液，它会很明显的降低western的信号，太弱的蛋白就检测不到了。临近蛋白可以跑几块胶，或者第二天重敷别的抗体

医往情深丁香园

2022-01-17

有帮助

洗完后没有条带，很可能说明你的抗体浓度过高或抗孵育时间过长，需要下调一下抗体浓度或缩短抗体孵育时间。

dxy_bq4uxnd

2022-01-17

有帮助

去除液中的有效成分是吐温20，吐温20的加入量的多少决定了清洗的干净程度，如果需要反复测量同一张膜上临近的几个条带，建议蛋白变性后多跑几遍，分别孵育。

jey1235

2022-01-17

有帮助

写在前边，一般意义上，不建议任何形式的 antibody stripping。后边的条带就算显出来，就不能再相信定量甚至定性的结果了。首先市面常用就是SDS变性原理，将表面抗体变性，打开抗体-抗原的相互作用从而将膜表面的抗体剥下来，实际上受限于不同实验室的操作，经常带来不可预计的各种后果，比如条带消失，背景变高，无法继续孵育下一个抗体，膜的不可逆损伤。不同抗体的效价不可预计，所以固定SDS比例的stripping buffer 就不可预计浸泡时间。样品不是万中无一的话，建议多跑一张SDS-PAGE吧。