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丁香通

条带弯曲,中间高两边低的原因?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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丁香实验

最近做的WB条带经常出现这样的现象(见下图),请问是什么原因导致的,下一步如何处理

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25 个回答

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一支肾上腺素

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可能的原因凝胶制备不均匀,中间冷却不好;或者是由于装置不合适,特别可能是凝胶和玻璃挡板底部有气泡,再一个就是可能凝固太快导致聚合不均匀。
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医往情深丁香园

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建议拿正常的样品再一起跑一下,如果正常说明是样品的问题,如果也是这样弯曲的话,那就是电泳制胶或者缓冲液的问题。
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内科小护士

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蛋白样品跑胶前要充分煮样,上样前的注意事项是高速离心,检查一下跑胶时的电压是否过大;其三,转膜的电压是否过大,建议100v恒压转膜。
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jey1235

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这是因为蛋白的分子量比较小,或者胶的分辨率不够,建议小分子使用Bicine去制胶,或者做梯度胶。可以明显改善条带扭曲。 PS:有时候buffer不是新鲜的,或者电压不稳定也会造成这种问题。要综合分析。
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JCorona

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由于marker基本无异常,故推测问题主要出在样品上,可能的原因:1.上样量过大;2.变性不充分;3.有杂质;4.电压不合适
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dxyhsx123

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蛋白浓度较高,建议减少上样量,同时loading buffer可以适量多加一些。
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小白野蛮成长

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制胶问题 如果还是不行的话建议调整电压
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verbalkint

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看图越往下弯的越厉害,配一个浓度高一点的胶,跑慢一点电压低一点。样品再次上样前多煮一下,然后离心混匀上样
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隔壁家的小夜猫子

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样品变性不充分,加新的loading重新煮。或者是跑胶的时候太热了,导致胶的性质变化。
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dxy_bq4uxnd

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从你的膜上可以看出来,蛋白marker是直的,说明你蛋白电泳的操作是没有问题的,那么问题应该就在你的样品上了,可能是上样量的问题,也可能是蛋白变性的时间不足,或是温度不够,建议延长变性时间。
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dxy_h7vcp8v3

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其一,蛋白样品跑胶前充分煮样,上样前高速离心,吸上清上样跑胶;其二,检查自己跑胶时的电压是否过大,建议浓缩胶80v 分离胶120v ,同时可以80v一直慢慢跑;其三,转膜的电压是否过大,建议100v恒压转膜。
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dxy_qkedgrg7

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1、上样体积一样吗,一般不平的话可能是上样体积不一样,最好是对称的跑。2、也可能是浓缩胶跑的时间太短,最好低电压压得时间长一点再换电压。3、还有一种可能是制的胶不好
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dxy_9kptsiw

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电极设备可能不太行,或者是胶配的不好凝聚不够。 试试80V一路跑下去
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兔子爱吃鱼

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有可能是电泳仪的问题,我们有一个电泳仪跑出来是这样的,另外一个跑出来就正常
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zxb597

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样品量问题,板子底没洗干净,跑胶问题,有无杂质?
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dxy_pni5ki46

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有可能是电压不合适,或者样品中如果有一些带电的物质也会影响电泳条带的形状
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ZZDX-YILILI

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1.出现这种问题最大的可能性就是胶没有配置好,胶凝固后不均一。 2.另外Marker正常的话,还有一种可能就是样品存在问题,或许样本中含有太多杂质,没有离心下来,使得加的样本实际是不均一蛋白样本。
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dxy_4uyyu09r

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你上样量正常吗?建议拿以前正常的样品再一起跑一下,如果正常说明是样品的问题,如果也是这样弯曲的话,那就是电泳制胶或者缓冲液的问题。
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dxy_w4oj7yoe

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可能是跑胶电压太高了,用低电压慢慢跑SDS-page,或者是样品太粘了,可以多煮一会样品
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dxy_pggo2lp2

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分析原因如下: 1.电极设备的问题,可能是设备老化,可以换个新电极 2.胶配置不匀 3.loadding buffer 及金属浴可能存在问题,没有充分使蛋白变性。
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