WB条带发光两端暗中间淡为什么？

蛋白定量后，总蛋白50ug上样，10孔中第一和十孔加marker，图为GAPDH内参，两端暗中间淡(每次淡的孔不一样，但是基本都是中间淡)，已经五次了，期间分别更换过抗体，也换过滤纸和海绵垫(刚开始考虑两边夹太紧，中间膨开接触不好)，更换过转膜的夹子，用过别的组的转膜槽，然后也不是发光液没浸泡，我是晃动浸泡1min了，发光显影时间很快的。实验陷入窘境。