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丁香通

封闭之后需要用 TBST 洗吗?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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小柴呀啦啦啦

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11 个回答

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左中右

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我会在TBST里涮一下,毕竟封闭液是5%的,而抗体稀释液是0.5%的,浓度差别很大,会对抗体孵育产生影响的。
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别家的葬礼

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封闭液和抗体稀释液都是5%的奶粉,封闭之后不用TBST洗。封闭液用5%奶粉,抗体稀释液不用奶粉的话,用TBST洗洗
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wd26persist

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如果封闭液是5%的牛奶,而一抗稀释液1%de BSA的话,需要用TBST过一下
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朱红艳1988

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最好还是洗一下,要不放到一抗里会稀释,一次没什么,次数多了就明显了!而且封闭用的奶粉和抗体稀释液不一样的时候一定要洗
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maoshiyun888

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简而言之,若封闭及一抗孵育全程均用脱脂奶粉,可以不用洗!
若考虑回收一抗,建议一抗用TBST稀释,这种情况就需要洗了!
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glypican

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如果封闭液和抗体稀释液都是5%的奶粉,封闭之后不用TBST洗。
如果封闭液用5%奶粉,抗体稀释液不用奶粉的话,用TBST洗洗
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loyh

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可以洗一下,只是想一抗不容易坏掉,因为牛奶放在4℃容易变质,如果你还想一抗回收再利用几次,建议洗一洗。不过背景有时候可能不好,会变很深!其实我实验过了,没啥差别,个别蛋白孵育一抗背景会变得难看!
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qianyu6

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我们需要洗,5%奶粉封闭是为了封闭非特异性蛋白,不然结果的背景会深,检测的蛋白不明显
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yhe00

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封闭完稍微用TBST泡一下,再放入一抗中
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503944937

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我们这边不用洗。封闭液和抗体稀释液都是5%的奶粉。
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yangmeng34

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用牛奶封闭的,最好洗一下,不然牛奶会混到一抗里面,影响一抗效价。
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