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做免疫沉降能否使用不同公司生产的抗体?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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xiongxiong321

各位前辈,我现在想测定目的蛋白的磷酸化水平,实验室拥有磷酸化抗体(sigma)和总蛋白抗体(santa cruz)但是抗体说明书所给出的条带大小不一样(sigma 40kDa santa cruz 62kDa)。我可以用两种不一样公司的抗体做IP么,比如用santa cruz的总蛋白抗体沉降后再做WB,分别用两种抗体检测总蛋白量和磷酸化蛋白量?如果可以的话是不是出现的条带位置也不一样,磷酸化在40 总蛋白在62?还是说必须用一种公司的抗体进行实验,十分困惑,求解,不胜感激。
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11 个回答

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此用户已注销

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这个还是比较困难
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EAjoyce

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不同公司的抗体识别的抗原表位是不一样的,如果目的蛋白在细胞内有过剪切或者其他修饰的话,不同抗体检测到的条带大小会差很多,建议查清楚抗体说明书:该抗体是否能做IP;其识别的抗原表位在哪里;然后再决定用何种抗体做IP比较合适
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远古的早晨

有帮助
应用同一公司的比较好!
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ccc2

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精益求精,比较难
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hjy130

有帮助
不能够。最好用同一个公司的产品!!
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小型公主

有帮助
最好不要用不同公司的,同一产品不同批号还有不同呢,何况不同公司呢?
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xianzhichong

有帮助
这个很难
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倪言

有帮助
只要使用的抗体是针对目的蛋白的,不是同一家的抗体是没关系的。
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roby_0_0_2000

有帮助
这个比较困难
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gaokaiyan

有帮助
比较困难。
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changhao6787

有帮助
能不能做IP要看抗体说明书,有适用范围;磷酸化和非磷酸化MW差不了这么多,基本是一致的,你可以看看sigma是不是对于截短的蛋白跑wb的,具体你目标蛋白的分子量(MW)你可以在NCBI上或是文献途径确定一下,没有要求鼻血用一种公司的抗体进行试验。
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