WB 敷牛奶需要多长时间？

相关实验：蛋白质免疫印迹(Western Blot，WB)

jianchi20

2013-04-26

请问 WB 实验时敷牛奶大概要多久？一定要过夜吗？

40 个回答

粗糙外科医生

2020-01-25

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完全没必要，室温1-2小时足够。

dxy_j89cp876

2019-08-21

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10%的，半个小时，低分子量蛋白结果还不错

U平台

2019-03-04

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4摄氏度过夜，或者室温1-2h，室温时间长一点也不会有太大影响，只要牛奶不长菌就行。

医者人生丶

2019-02-22

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30分钟足够了

yyygo

2015-09-09

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如果是过夜的话，是 4 度静置过夜；如果是室温，是室温下摇晃的孵育 60 分钟。

健坤免疫组化

2015-09-07

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建议过夜，通过 4℃ 孵育过夜延长抗原和抗体的反应时间以获得最好的信噪比是非常关键的。

zhengfuggs

2015-05-25

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5%牛奶恒温摇床两小时，最好4度过夜。

yangmeng34

2014-10-09

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5%脱脂牛奶室温封闭一小时就可以了，如果是做磷酸化的蛋白，最好用5%的BSA封闭。

genetex

2014-08-27

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封闭剂有分为脱脂牛奶或是 BSA。用脱脂牛奶主要是因为一般牛奶中的油脂会影响 WB 的实验，使用脱指牛奶必须注意要将奶粉溶解完全。脱指牛奶配好后放在冰箱也不要超过一个星期，容易滋生细菌, 最好新鲜配置。脱指牛奶从 1%~10% 都有人在使用，时间上室温 1-2 个小时或是 4 度隔夜。主要还是看您第一次封闭后的效果然后再去做调整，有任何其他关于抗体实验相关问题也可以随时提问囉 :)

sunbojiayou

2013-11-27

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我做的是37度摇床封闭一个半小时。

wbjcfx

2013-10-27

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我们一般是摇床2小时或是4度过夜这两种对结果没啥影响的

会飞的死猪

2013-10-21

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5%~15% 的脱脂奶粉，封闭 2h

lee800265

2013-10-15

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我一般用10% non-fat milk/TBST（w/v）封闭，NC膜封闭10-30 min，PVDF30-60 min，完全没有问题。一抗和二抗都在5% non-fat milk/TBST或者2.5% BSA/TBST中孵育。个人观点，封闭其实并非western关键步骤，我有时候试过5min封闭，或者干脆直接将膜放在一抗中，没有显著性差异。