难消化的新鲜组织提取出的RNA建库后QPCR不合格，有什么方法可以改善？

1.将你的组织，直接放到trizo里，再进行剪碎。2.用液氮将组织冻住后，研钵内弄碎后，再加入trizol。3.买个组织提取rna的kit，可以试试。

在RNA提取过程中凡是与RNA接触到的器皿都必须是RNase-free的，具体可通过以下两种方式获得：DEPC处理失活RNase：用含有DEPC的水浸泡实验器皿失活RNase，然后进行高温灭菌。

或者直接购买RNase-free的实验耗材：适用于经费充足的实验室，放心可靠。

在收获组织及细胞死亡之后，应立即灭活内源的 RNA 酶，以防止 RNA 降解。

1）用含离液（如胍盐）的细胞裂解液收获样品并立即匀浆。

2）用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是：组织块必须保证足够小，在浸入液氮的瞬间就能冻结，以确保瞬间令 RNA 酶失活

3）立即将样品置于 RNAlater ? Tissue Collection : RNA Stabilization Solution 中。它是一种水相、无毒的收集试剂，能立即稳定并保护完整、未冻结的组织和细胞样品中的 RNA 。关键要点是组织样品切片一定要够薄（く0.5 cm )，这样 RNAlater 才能在 RNase 破坏 RNA 之前迅速渗入组织块中。