p 一段 579bp 的基因，p 了 n 次都没成功是为什么？

条件：dNTP：0.5ul，Buffer：2ul，Mg2+:0.6ul，-F/R:0.6ul，genomic DNA：1ul，H2O：14.7ul
分别在50、56、60度跑过，DMSO+/—,都没有跑出明显条带。 PS：上游引物的第2个碱基有多态性，会影响么？