p 一段 579bp 的基因，p 了 n 次都没成功是为什么？

earthlh

2013-08-24

条件：dNTP：0.5ul，Buffer：2ul，Mg2+:0.6ul，-F/R:0.6ul，genomic DNA：1ul，H2O：14.7ul
分别在50、56、60度跑过，DMSO+/—,都没有跑出明显条带。 PS：上游引物的第2个碱基有多态性，会影响么？

benjimmy33108

2013-08-31

有帮助

如果就是第二个碱基一个有多态性，那么一般不会有多大影响的，建议你换一个聚合酶试一试，我P过很基因，有些基因就是有一些酶怎么设置都P不出来，结果其他几种可能就能P出来，或者你可以拿最普通的2X预混的先摸一下退货温度之后，看看能否P出来，再进行高保真的PCR.

此用户已注销

2013-08-31

有帮助

扩增10个正常人，如果有人出来，有人出不来，那就是你的碱基多态性导致的。

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