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病毒分离时没有病变,PCR也没有条带

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酒鬼的余额宝

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4 个回答

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

pcr没有条带说明转导失败,可能是质粒的问题,也可能是引物的问题

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huarenqiang5

有帮助

考虑以下几点原因及建议:

1、酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA 聚合酶因保存或运输不当而失活,往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。


2、模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸,造成 DNA 脱嘌呤而影响 PCR 的结果。


3、变性温度是否准确:PCR 仪指示温度与实际温度是否相符,过高酶在前几个循环就迅速失活;过低则模板变性不彻底。


4、反应系统中污染了蛋白酶及核酸酶,应在未加 Taq 酶以前,将反应体系 95℃ 加热 5~10 分钟。


5、引物变质失效。人工合成的引物是否正确。是否纯化,或因储存条件不当而失活。

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高山云初

有帮助

可以利用 BLAST 检查引物特异性或重新设计引物。再就是DNA 凝胶电泳时加入阳性对照,排除 DNA 凝胶和 PCR 程序的问题。

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sswei

有帮助

引物错误。利用 BLAST 检查引物特异性或重新设计引物。

DNA 凝胶电泳时加入阳性对照,确保不是 DNA 凝胶和 PCR 程序的问题。

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