接毒后为什么没有病变

sjelly：我的CEF在接了马立克病毒后，一直没有病变出现，于是盲传了3代，还是没有病变，但是每一代提基因组还能P出病毒的条带来，而且很亮。我接了3批不同时间冻存的病毒，其中有两批是以前出过病变的，但是现在不知道为什么变这样了，是哪里出了问题啊？

丁香园网友bjzhaohong3认为：

不知楼主接种病毒病变时改变血清浓度没有，我们养细胞时血清是10%.而稀释接种病毒时血清浓度是2-3%.

sjelly反馈：

用的是2%血清的生长液啊，而且以前也是一样的方法，最近不知道咋的就是不出病变了啊！我也不知道是哪个环节出了问题。高手，帮帮忙，指点迷津！

丁香园网友bjzhaohong3认为：

你的病毒是否需要复壮自己试一下翻毒吧！

丁香园网友sjelly询问：

你接毒的时候通常是用多少转离心几分钟收集细胞的啊，我都是用4000转5分钟

丁香园网友everlisa认为：

如果你的病毒是胞内的：

1.收获之后-80度到37度冻融三次，4度离心4000RPM25-30分钟

2.细胞状态要好而且接种的密度要适当，可以70-85%不要太密集

3.接毒之后的培养基采用维持液降低血清浓度，FBS5-2%即可

4.接种之后尽量减少移动接种细胞的次数，因为这时细胞比较容易脱壁.

丁香园网友bactrium认为：

你可以接毒后放到培养箱里面吸附30min试一下

毒种在继代的过程中可能会毒力下降的情况

你能p出来说明病毒还是有一定量的增植的

建议继续盲传

丁香园网友sjelly认为：

是我的生长液不行，缓冲能力太弱，PH值不对，现在换了新的生长液，已经出蚀斑了.谢谢大家