一定要顺利毕业呀
过氧化氢造肝细胞氧化损伤模型的标准是什么呀,看文献上一般为IC50,在这个指标下如何确定细胞被损伤而不是坏死呢?
春风十里WW
请问楼主用过氧化氢建立氧化损伤模型成功了吗?重复性好吗?
balalaLy
先确定IC50,再做功能表型,比如测ROS,线粒体膜电位等反映氧化损伤的指标。
周末也要努力呀
做流式细胞术检测可以区分或者PI/钙黄绿素染色
毛利小五郎的徒弟
一般是看sod的活力显著降低就代表模型损伤成功
静心观照
细胞受到H2O2损伤后,细胞内生成大量活性自由基,引发细胞膜上脂质过氧化反应,生成终产物MDA;并且大量损耗细胞内源性抗氧化剂如GSH等 破坏细胞内氧化与抗氧化平衡使细胞处于氧化应激状态。 同时,受损的肝细胞膜通诱性增强,胞内酶如转氨酶等大量释放至培养液。因此,除MTT法检测细胞生长抑制率外,培养液中ALT、AST和LDH活性检测亦有助于确认模型的构建是否成功,特别是细胞抗氧化活力的变化可更准确地描述氧化损伤模型的功能。
小小小小小芳
构建成功的判断标准是引起细胞氧化应激的同时
对细胞造成较小的损伤(实验组与对照组相比ROS水
平升高,实验组与对照组比细胞存活率没有明显差
异)。
判断指标:MTT、CCK8等测定细胞存活(通常
做法为利用将细胞铺到96孔板中,用不同浓度应激
源处理相同时间后检测细胞活性);流式检测凋亡情
况,WB检测凋亡marker变化情况;DCFDA法测定
ROS(最直接的方法,DCFDA是一种通用的氧化应
激指示剂。具细胞膜渗透性,本身无荧光