提取PBMc用于培养，但是细胞存活率低，怎样提高细胞存活率？

可以在培养基中多加点血清进行培养

提高血清浓度降低细胞密度可以提高细胞存活率

如果比较难养建议更换好的血清，平时勤换培养基

如果细胞存活率较低，可以尝试以下方法来提高细胞存活率：

1. 优化胰酶消化条件：

a. 胰酶浓度：胰酶浓度对于消化细胞的效果至关重要。通常推荐的浓度范围是0.25%-2%（w/v）。

b. 胰酶消化时间：消化时间对于细胞活性至关重要。尝试不同的消化时间，例如2-10分钟，以找到最佳的消化时间。

c. 温度：消化温度会影响消化效果。尝试在37℃或室温下进行消化。

2. 消化过程中的冷却：胰酶消化过程中，细胞会受到一定程度的损伤。在消化过程中，可以采用冰上消化的方法来降低温度，以减少细胞损伤。

3. 消化后的操作：

a. 避免机械损伤：在将消化后的细胞离心、重悬和接种过程中，尽量减少细胞受到的机械损伤。可以使用细胞过滤器（细胞过滤器可过滤掉大部分胰酶和细胞碎片）过滤细胞悬液。

b. 洗涤：用无菌的PBS对消化后的细胞进行洗涤，以去除残留的胰酶和其他细胞碎片。

c. 接种细胞密度：尽量将细胞接种在合适的细胞密度（10^5-10^6 cells/ml），以利于细胞生长。

d. 培养条件：确保培养基成分和质量合格，并调整培养环境（温度、湿度、CO2浓度等）以利于细胞生长。

4. 使用高质量的细胞培养基：选择高质量的培养基，以确保细胞营养充足。通常，RPMI 1640、DMEM等培养基中含有的营养成分较为丰富，适合大多数细胞类型。

5. 避免细胞的反复冻融：尽量减少细胞的冻融次数，因为这会导致细胞损伤和死亡率增加。

根据细胞生长情况,即使更换新鲜培养基.

血清一般要冻存在-20摄氏度,用的时候在4摄氏度融化,不要反复冻存,最好用10ml的离心管分装使用.

1.要保证无菌,包括无菌操作,无菌环境.枪头等要及时灭菌,培养瓶,移液管最好使用一次性的,如果你的细胞比较不好养,最好使用一次性的.

2.要传代的时候细胞传代的数量不能太少,否则细胞不容易养活.另外,传代不要过度频繁,即使是肿瘤细胞.

3.不要经常用胰酶消化细胞,且消化时间不要过长.

样品的新鲜度以及保存方式影响细胞存活率，此外需要用到红细胞裂解试剂去除红细胞的影响