丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册

分泌性蛋白超滤浓缩后做WB

user-title

flower15

各位老师好,我在收集细胞上清提取分泌蛋白过程中采用的是超滤浓缩法,0.45um滤器过滤后用30kDa超滤管超滤然后过夜冻干之后加SDS裂解液之后加loading煮10分钟,但是煮了之后蛋白变成了胶冻状,不知道是我的哪一个步骤除了问题呢?

wx-share
分享

4 个回答

user-title

高山云初

有帮助

可以将体积浓缩至20倍以下,再定量到同一体积。需要外泌体内参。是用BCA检测,检测不到可能是因为标准液的浓度不匹配,建议对浓缩后的蛋白进行小体积稀释,可以多测几个稀释度的浓度定量更准

user-title

周末也要努力呀

有帮助

增加裂解时间,或者超声彻底断裂。同时检查一下裂解液成分和loading是否变质

user-title

粥辰辰辰辰

有帮助

蛋白浓度太高的原因,而你加的是5 loading buffer,SDS的浓度不够高。你可以把样品稀释一下试试,就好了。

user-title

此用户已注销

有帮助

那是有DNA断裂,超声试一下。

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序