虾如何提取肌原纤维蛋白？拜托各位大神最好讲解一下原理。

肌原纤维蛋白提取：将虾蛄肉加入蛋白提取液，高速匀浆后离心留沉淀，重复上述操作，得到肌原纤维粗蛋白；将所得肌原纤维粗蛋白再加入盐溶液高速匀浆离心留沉淀，重复上述操作，即得肌原纤维蛋白；

准确称取5.0 g的虾肉糜样品，按1∶9(g∶mL)加入9倍体积生理盐水，于冰浴条件匀浆处理(2 500 r/min，10 min)，得到的上清液，即为提取的肌原纤维蛋白溶液，置于4 ℃冰箱备用。

肌肉蛋白的提取下图是1，上图是2

将虾蛄肉加入蛋白提取液，高速匀浆后离心留沉淀，重复上述操作，得到肌原纤维粗蛋白；将所得肌原纤维粗蛋白再加入盐溶液高速匀浆离心留沉淀，重复上述操作，即得肌原纤维蛋白。

虾中提取肌原纤维蛋白的过程可以简化为以下几个步骤：

1. 虾肉准备：将新鲜的虾清洗干净，剥去外壳，取出虾肉。如果需要，可以将虾肉切成小块以便于处理。

2. 磨碎虾肉：将虾肉放入食品加工机中，磨成细腻的肉泥。

3. 添加提取液：将虾肉泥转移到一个适当的容器中，加入适量的提取液。提取液可以是水、盐水、酸水等，具体取决于所需的提取方法和产品应用。这些液体有助于将肌原纤维蛋白从虾肉中分离出来。

4. 搅拌与静置：将混合物搅拌均匀，然后静置一段时间，让肌原纤维蛋白沉淀下来。这个过程可能需要几个小时，取决于所使用的提取液和虾肉的新鲜度。

5. 分离肌原纤维蛋白：将静置后的混合物过滤或离心，将肌原纤维蛋白与液体分离。如果使用离心，可能需要使用不同的离心速度和时间，以获得最佳的肌原纤维蛋白提取效果。

6. 洗涤与干燥：将分离出的肌原纤维蛋白用水或盐水洗涤，以去除多余的杂质。然后，将洗涤后的肌原纤维蛋白置于干燥器中干燥。干燥过程中，需要确保干燥温度适宜，以防止肌原纤维蛋白变性或降解。

原理：

肌原纤维蛋白是肌肉组织中的一种主要蛋白质，负责肌肉的收缩和舒张。在提取过程中，通过使用适当的提取液和搅拌，肌原纤维蛋白被从肌肉细胞中分离出来。这些提取液有助于破坏肌肉细胞，并释放出肌原纤维蛋白。在静置过程中，肌原纤维蛋白和其他悬浮颗粒逐渐沉淀下来，从而实现分离。最后，通过过滤或离心将肌原纤维蛋白与液体分离，然后进行洗涤和干燥。

目前从虾中分离纯化TM蛋白的工艺一般分为三个阶段：

第一阶段是制备虾纤维蛋白干粉，具体过程为：将对虾洗净，除去虾壳和虾肉表面的膜，然后将机体组织特别是肌肉组织置于一定体积的且具有一定离子强度的缓冲液(pH≈7.0)中，室温下匀浆，离心后收集沉淀，此时可以除去大部分的肌浆蛋白。所收集的沉淀中加入预冷的有机溶剂，如乙醇，乙醚或丙酮等，反复抽提并离心，利用有机溶剂除去沉淀中的脂质成分，脱脂后的沉淀再经自然风干就可得到纤维蛋白干粉。

第二阶段是KCl溶液浸提再结合硫酸铵盐析沉淀提取虾纤维蛋白粉中的TM蛋白，具体步骤为：将所获得的纤维蛋白干粉复溶于含有1mol/L KCl的中性缓冲液中，利用TM蛋白的盐溶性，获取原肌球蛋白粗提液，在提取过程中加入一些保护剂，如二硫苏糖醇、β-巯基乙醇等，防止晶体蛋白高分子形成聚合物，使蛋白质保持原有的构象，同时，加入低浓度的氯化钙可稳定原肌球蛋白结构保持其天然构象。然后加入一定量的(NH4)2SO4或NaCl等中性盐，混匀后静置一段时间再离心透析、冻干等步骤，获得一定纯度的TM蛋白粗品。

第三阶段通常是利用层析技术进行TM蛋白的纯化，如分子筛层析、离子交换层析、HPLC等技术，最终获得纯度较高的TM蛋白制品。

目前用于制备TM蛋白粗品的方法较为成熟，人们都是利用前面所述的方法来制备虾纤维蛋白粉以及盐溶液浸提，盐析沉淀分离得到有一定纯度的TM蛋白粗品。但是其纯化工艺仍然存在一定问题：

1、从动物机体提取分离得到的TM蛋白纯度不高，利用目前已有的纯化工艺路线，无论是分子筛、离子交换层析或HPLC所得样品的纯度均小于95％；

2、现有的纯化工艺中，HPLC纯化技术所用的仪器昂贵、耗材贵(无论是纯化柱材料还是洗脱溶剂)、制备规模小且样品不易回收；离子交换层析法的目的蛋白存在于洗脱峰中，所得样品的纯度也不高，需要再接一次分子筛层析法才能够将纯提高到90％以上，但是这种纯化工艺的处理量不高，分子筛的显著缺点就是其纯化工艺虽简单，由于处理量太小，不利于规模化处理纯化样品。