丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册

咨询一下广大的网友,我接下来需要在秀丽隐杆线虫体内过表达自身的miRNA,如何选择载体?

user-title

dxy_g9vdp373


wx-share
分享

4 个回答

user-title

dxyc42u

有帮助

选择构建过表达质粒就可以了。。

user-title

sswei

有帮助

MicroRNA过表达载体的构建可以采用miRNA的前体序列作为目的基因插入载体,也有研究采用的是包含microRNA前体序列两端的侧翼序列在内的核苷酸并经基因组DNA扩增后作为目的基因插入到AAV或者LV病毒载体中,生产的病毒颗粒可以直接用于感染细胞或者动物实验。

user-title

loveliufudan

有帮助

在选择载体用于秀丽隐杆线虫体内的miRNA过表达时,您可以考虑以下因素:

1. Promoter(启动子):选择适合线虫表达的启动子。常用的启动子包括Pgpa-4(肌肉特异性)、Pdpy-30(肠道特异性)、Punc-54(神经肌肉特异性)等。根据您希望miRNA表达的组织和细胞类型,选择合适的启动子。

2. miRNA前体(pre-miRNA)序列:将您希望过表达的miRNA的前体序列嵌入载体。确保您选择的载体可以容纳所需的miRNA前体序列,并且能够产生成熟的miRNA。

3. 标签或报告基因:考虑是否需要在miRNA过表达的线虫中标记或检测miRNA的表达。您可以选择将荧光标签或报告基因(如绿色荧光蛋白GFP)与miRNA在同一载体中组合。

4. 抗性标记:选择带有抗性标记(如抗生素耐药基因)的载体,以方便在线虫培养中选择转染成功的线虫。

常用的miRNA过表达载体包括pPD49.78、pPD49.83、pCFJ90等。这些载体已经在C. elegans研究中得到广泛应用,但具体选择仍取决于您的实验需求和预期结果。

user-title

毛利小五郎的徒弟

有帮助

可以选择质粒载体,成功率比较高。

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序