蛋白质分离纯化过程中各种缓冲液如何配制

这些缓冲液的配制主要涉及到以下化学物质：Tris，盐酸，NaCl，EDTA，NaH2PO4，PMSF和protease inhibitor cocktail。下面是每种缓冲液的具体配制方法：

1. 匀浆缓冲液：先在适当体积的去离子水中溶解适量的Tris和NaCl，再加入EDTA。之后使用盐酸或者氢氧化钠调整pH到8.0。所有物质应配成最终浓度为200 mM Tris-HCl，150 mM NaCl和10 mM EDTA。

2. Tris-HCl缓冲液：在适当体积的去离子水中溶解适量的Tris，使用盐酸或者氢氧化钠调整pH到8.0。Tris的最终浓度应为50 mM。

3. 20 mM NaH2PO4，pH 7.2, 加 500 mM NaCl：首先在适当体积的去离子水中溶解适量的NaH2PO4和NaCl，然后使用氢氧化钠或者盐酸调整pH到7.2。NaH2PO4和NaCl的最终浓度应为20 mM和500 mM。

4. 含有1 mM PMSF、1 mM cocktail的50 mM Tris-HCl缓冲液 (pH 7.4)：首先在适当体积的去离子水中溶解适量的Tris，然后使用盐酸或者氢氧化钠调整pH到7.4。Tris的最终浓度应为50 mM。最后在这个溶液中溶解适量的PMSF和protease inhibitor cocktail，使得它们的最终浓度都为1 mM。

5. 缓冲溶液中NaCl从0到400 mM递增的洗脱溶液：这通常是一系列的缓冲液，每种缓冲液的NaCl浓度都比上一种稍高一些。配制这些缓冲液时，可以首先配制一种NaCl浓度为400 mM的缓冲液，然后适当稀释这种缓冲液以得到不同NaCl浓度的其他缓冲液。

需要准备对应的干粉溶剂，用浓盐酸调ph

Tris-HCl缓冲液的配制方法：

使50ml 0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与x ml 0.1mol/L 盐酸混匀后，加水稀释至100ml即可配置成功。