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土井挞克树
酶活力的测定 :
蛋白酶在一定条件下不仅能够水解蛋白质中的肽键,也能够水 解酰胺键和酯键, 因此可用蛋白质或人工合成的酰胺及酯类化合物作为底物来测 定蛋白酶的活力。具体可以使用elisa来检测酶活力
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产蛋白酶菌株的筛选和酶活力的测定方法和数据处理方法可能因实验条件、实验设计等因素而有所不同,常见的方法和参考文献如下:
筛选方法:通常使用胶体酶原酶切片法(gelatinase zymography)或琼脂糖酶切片法(casein zymography)筛选产蛋白酶菌株。其中,胶体酶原酶切片法以明胶为底物,可检测出凝胶中明胶酶、胶原酶等蛋白酶活性;琼脂糖酶切片法以琼脂糖为底物,可检测出凝胶中卟啉蛋白酶、胰蛋白酶等蛋白酶活性。参考文献:Bajpai VK et al. 2008. Gelatinolytic and fibrinolytic activity of Bacillus cereus protease. Food Chemistry 111:472–477.
酶活力测定方法:可使用标准质量浓度的明胶、胶原蛋白、卟啉蛋白等底物,结合比色法、荧光法等技术测定产酶菌株的蛋白酶活力。参考文献:Zhang Y et al. 2016. Optimization of production conditions for alkaline protease by a newly isolated Bacillus sp. YF23 and characterization of its properties. Journal of Microbiology and Biotechnology 26:377–387.
数据处理方法:可采用比较法或校正法计算产酶菌株的酶活力。比较法将菌株酶活力与标准菌株或对照组酶活力进行比较;校正法则在菌株酶活力测定前加入抑制剂或在测定过程中进行加标校正,得到准确的酶活力数据。参考文献:Bhunia B et al. 2018. Purification and characterization of extracellular proteases from the endophytic fungus Colletotrichum sp. ALF2 and their potential for soy protein hydrolysis. Food Science and Biotechnology 27:885–892.