旧人EJYH
做了几次预实验,用C57的雌鼠PMSG+HCG超排后配种,次日下午注射带GFP标签的慢病毒,注射后当时死亡的胚胎不多,但是注射后次日发育到2细胞的胚胎就停止发育,然后就死了。其中慢病毒浓缩后是用养293T细胞带血清的DMEM(+)稀释的,滴度在10的6至8次方个单位。想问一下是不跟这个有关系?血清里边有激素。
毛利小五郎的徒弟
先降低一下滴度,然后可以调整一下慢病毒类型,使用高滴度高纯度的慢病毒,可以减少病毒中的杂质对细胞状态的影响:降低慢病毒对细胞的毒性
另外调整细胞状态,感染时使用对数期的细胞
旧人EJYH
除了毒的问题,我实在想不出还有什么原因会导致胚胎停滞或死亡了。
loveliufudan
可能有多种原因,包括慢病毒的毒性、注射技术和实验条件等。
首先,慢病毒是一种有机病毒,可以导致宿主细胞死亡,影响胚胎的发育。您使用的带GFP标签的慢病毒浓度在10^6-8的单位,也可能对小鼠受精卵造成了毒性影响。因此,建议您优化慢病毒的浓度和处理方式,以减少慢病毒对胚胎的不良影响。
其次,注射技术也可能是一个问题。小鼠受精卵非常脆弱,需要非常小心和精确的技术才能成功进行显微注射。注射的位置、深度和角度等因素都可能影响胚胎的发育和生存。建议您检查注射技术,确保注射位置和注射量都准确无误。
最后,您提到使用含有血清的DMEM稀释慢病毒。血清中含有激素,可能会对小鼠受精卵的发育产生影响。因此,建议您尝试使用无血清培养基,或对血清进行更多的筛选,以降低血清中激素对胚胎的影响。
旧人EJYH
做对照组培养箱和培养液都没问题,可以正常发育至桑椹胚。
注射系统问题不大,之前做小鼠的受精卵核空腔注射胚胎也能正常发育,那个针尖插的位置要更深,并且可能会损伤核仁。透明带下注射只需要扎破透明带注射就行,对胚胎的损伤要更小。所以很有可能还是过表达载体的问题。
除了毒的问题,我实在想不出还有什么原因会导致胚胎停滞或死亡了。