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z流沙z
可以等细胞静置后,轻拿轻放,然后轻轻吸取上清,不要吸干,这样细胞大部分都还在底部,或者是进行离心。
loveliufudan
以下是一个可行的方案,适用于悬浮细胞的LDH测定:
材料:
悬浮细胞样品
LDH检测试剂盒
1.5mL离心管
微量离心管
离心机
移液管
步骤:
取约1x10^6个悬浮细胞,并用PBS洗涤一次,以去除培养基中的血清蛋白和其它蛋白质。将细胞悬浮于1ml培养基中。
将细胞分配到两个1.5mL离心管中,每个离心管中约有500,000个细胞。
将一份样品暴露于室温下30分钟,作为正对照组,使细胞膜完全破裂并释放LDH。
将另一个样品与同等体积的LDH反应液混合,作为实验组。
将两个离心管离心5分钟,以去除细胞碎片和其它颗粒物。
将每个离心管中的上清移至微量离心管中,再离心5分钟以去除残留的细胞碎片。
将上清液分别移至96孔板中的相应孔中。
加入LDH底物,并按照检测试剂盒的说明进行反应。
在反应结束后,用酶标仪测量吸光度,并计算LDH释放量。
注:实验中可以采用同样的细胞数来进行对比。在第3步中,应该将细胞完全破裂并释放LDH,以确保正对照组的LDH释放量最大。同时,在样品处理过程中应该避免细胞受到额外的机械刺激或振荡,以免影响实验结果。