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请问悬浮细胞怎么做LDH检测呀?我们这没有96孔板离心机,一吸上清把细胞也吸上来了

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hmz2VLK


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2 个回答

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z流沙z

有帮助

可以等细胞静置后,轻拿轻放,然后轻轻吸取上清,不要吸干,这样细胞大部分都还在底部,或者是进行离心。

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loveliufudan

有帮助

以下是一个可行的方案,适用于悬浮细胞的LDH测定:

材料:

悬浮细胞样品

LDH检测试剂盒

1.5mL离心管

微量离心管

离心机

移液管

步骤:

取约1x10^6个悬浮细胞,并用PBS洗涤一次,以去除培养基中的血清蛋白和其它蛋白质。将细胞悬浮于1ml培养基中。

将细胞分配到两个1.5mL离心管中,每个离心管中约有500,000个细胞。

将一份样品暴露于室温下30分钟,作为正对照组,使细胞膜完全破裂并释放LDH。

将另一个样品与同等体积的LDH反应液混合,作为实验组。

将两个离心管离心5分钟,以去除细胞碎片和其它颗粒物。

将每个离心管中的上清移至微量离心管中,再离心5分钟以去除残留的细胞碎片。

将上清液分别移至96孔板中的相应孔中。

加入LDH底物,并按照检测试剂盒的说明进行反应。

在反应结束后,用酶标仪测量吸光度,并计算LDH释放量。

注:实验中可以采用同样的细胞数来进行对比。在第3步中,应该将细胞完全破裂并释放LDH,以确保正对照组的LDH释放量最大。同时,在样品处理过程中应该避免细胞受到额外的机械刺激或振荡,以免影响实验结果。

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