鼓鼓大师
1. 每组取小鼠,颈椎脱臼后置于动物操作台上,剪开腹壁皮肤和肌肉,找到位于左上腹、长约3-4厘米、呈长条状的深红色组织,即为脾脏。
2. 在 35mm培养皿中放入 4mL EZ-Sep™ Mouse 1× 淋巴细胞分离液(取用前摇匀)。
3. 研磨脾脏
4.把悬有脾脏细胞的分离液立即转移到15mL 离心管中,覆盖 500 uL的 1640 培养基(保持液面分界明显)
5.室温,800g 离心 30min。
6.吸出淋巴细胞层,再加入 10mL 1640 培养基,颠倒洗涤。室温,250g离心10min 收集细胞。
7.将收集好的细胞用1.5mL的PBS重悬,重悬后的细胞分别各取出100μL置于1.5mL的离心管中。
8.两管100μL离心管中的细胞分别为阴性对照组和CD3/4/8组,在CD3/4/8组分别加入1μL的CD3-FITC、CD4-PE和CD8-APC,室温避光放置15-30min后,加入1mL 的PBS洗去多余抗体。
9.1500rpm离心5min离心,去除上清。弃上清,再次加入0.3-0.5mL 的PBS重悬细胞,上流式细胞仪进行检测。把悬有脾脏细胞的分离液立即转移到15mL 离心管中,覆盖 500 uL的 1640 培养基(保持液面分界明显)
结果:
毛利小五郎的徒弟
可能是胸腺外途径来源的T细胞。
loveliufudan
CD3和CD4双阴性T细胞占比较高可能是由于多种因素引起的,比如:
实验操作不当:在样本制备和染色过程中,可能存在诸如细胞破坏、染色失真等因素,影响了检测结果的准确性。
病理状态影响:在某些疾病的状态下,例如感染、自身免疫性疾病等,CD3和CD4双阴性T细胞可能会增加。
未知细胞类型:有时候,在细胞表面标记不完全的情况下,某些细胞类型可能会被错误地分类。
CD3和CD4双阴性T细胞可能是一种比较罕见的T细胞亚型,目前还没有很深入的研究。但是一些研究表明,这些细胞可能与某些疾病的发展有关。因此,对于高比例的CD3和CD4双阴性T细胞,需要进一步的研究来探究其生物学意义。