在做一个酶抑制活性的实验。但是目前对加样顺序困住了。有底物，辅酶，抑制剂，酶（依赖辅酶的酶），pbs溶液。

因为在pbs溶液中孵育时间的不同，会使底物和酶反应不同，所以要求两者加的次序不同。

在进行酶抑制活性实验时，加样的顺序对实验结果可能会产生影响。根据您提供的信息，可以给出以下建议：

根据文献中的方法先尝试：抑制剂，酶，PBS先孵育15分钟，再加入底物和NADPH，在37℃下反应10分钟，最后测吸光度。这种方法先将酶和抑制剂孵育一段时间，让它们充分发生反应，再加入底物和辅酶进行反应，这样可以尽可能地减少酶的活性对实验结果的影响，比较可靠。

如果第一种方法不能获得满意的结果，可以尝试第二种方法：抑制剂，底物，PBS中孵育10分钟，再加入酶和NADPH反应，最后测吸光度。这种方法先将底物和抑制剂孵育一段时间，让它们充分反应，再加入酶和辅酶，可以有效地抑制酶的活性，从而减少实验误差。

无论采用哪种方法，都应该保证每个步骤的时间和温度控制相同，以减小实验误差。同时，如果可能的话，最好设置对照组，以确保实验结果的可靠性。

我的习惯是第一种，先加入酶，这样的成功率高一些