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丁香通

做克隆转化,t载体连接转化后涂平板不长菌是什么原因?

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RecipeIWU4

本人目的基因长2000bp和1000bp,是不是pcr片段过长要调整体系?


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4 个回答

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汤姆卜丽波

有帮助

这个长度挺大的,可能是没连上,重新设计一下引物

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huarenqiang5

有帮助

主要考虑培养基、温度、PH值问题导致。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

pcr不建议做的过长,过长不好培养,建议缩短

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loveliufudan

有帮助

如果您的转化后的涂平板上没有任何细菌生长,可能是由于以下原因之一:

转化效率低:转化过程中DNA与细胞的接触不足或细胞质膜的破坏不彻底,导致转化效率低。

细菌处理不当:细菌可能受到污染或在处理过程中遭受到伤害,如温度过高或过低、过度振荡等,导致细菌失活。

培养条件不适宜:培养基成分、pH值、温度、气氛等因素可能导致细菌无法生长。

至于您提到的PCR片段过长,的确会影响克隆转化的效率。您可以考虑优化PCR反应体系,如优化引物浓度、调整PCR反应温度和时间等,以提高PCR产物的纯度和数量,从而提高转化效率。此外,您也可以尝试使用高效的化学转化方法,如CaCl2转化法或电转化法,以提高转化效率。

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