做克隆转化，t载体连接转化后涂平板不长菌是什么原因？

这个长度挺大的，可能是没连上，重新设计一下引物

主要考虑培养基、温度、PH值问题导致。

pcr不建议做的过长，过长不好培养，建议缩短

如果您的转化后的涂平板上没有任何细菌生长，可能是由于以下原因之一：

转化效率低：转化过程中DNA与细胞的接触不足或细胞质膜的破坏不彻底，导致转化效率低。

细菌处理不当：细菌可能受到污染或在处理过程中遭受到伤害，如温度过高或过低、过度振荡等，导致细菌失活。

培养条件不适宜：培养基成分、pH值、温度、气氛等因素可能导致细菌无法生长。

至于您提到的PCR片段过长，的确会影响克隆转化的效率。您可以考虑优化PCR反应体系，如优化引物浓度、调整PCR反应温度和时间等，以提高PCR产物的纯度和数量，从而提高转化效率。此外，您也可以尝试使用高效的化学转化方法，如CaCl2转化法或电转化法，以提高转化效率。