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引物探针检测低浓度样本不稳定,并且检测浓度与真实浓度相比忽高忽低,这种情况下该如何优化?使反应体系更稳定。

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dxy_z7y46the


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3 个回答

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土井挞克树

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增加稳定剂,选用成熟的试剂会稳定体系。

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huarenqiang5

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建议低压冻干的引物在储存时间和温度方面具有更好的灵活性。引物一旦重新溶解,即应置于 -20 °C 保存,且若保存时间超过一年则应对其进行监测,看它是否出现功能下降。对于标记的引物和探针,则应采取措施避免标记物曝光(例如使用不透明管及置于暗处保存),以延长它们的使用寿命。

引物浓度也可影响其稳定性。建议引物的储存浓度不低于 10 μM;实际上,在大多数情况下,100 μM 的引物浓度操作更简单。引物和探针还应分装保存,以减少冻融次数,特别是标记的引物和探针。最后,TE 缓冲液可形成比水更为稳定的环境。此外,含有 0.1 mM EDTA 的 TE 缓冲液(标准 TE 中含有 1 mM EDTA)是一种理想的溶液,这是由于一些 PCR 反应对 EDTA 的灵敏度可能有一些残存。



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loveliufudan

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引物探针检测低浓度样品不稳定主要是由于该方法对样品浓度有一定要求。下面是一些常用的优化方法:

使用适当浓度的标准品:在实验中使用适当浓度的标准品可以帮助校准检测系统,确保检测结果准确。

改变扩增参数:一些参数,如扩增温度和时间,对检测结果有很大影响。改变这些参数可以使扩增更稳定。

使用更高质量的试剂:使用高质量的试剂可以降低试剂的不稳定因素对检测结果的影响。

使用不同的引物:更换引物可以确保扩增效果较好,从而提高检测效率。

调整样品预处理:对样品进行适当预处理,如纯化或提取,可以提高检测灵敏度,减少干扰。

这些方法可以帮助提高引物探针检测低浓度样品的稳定性和准确性,但是最佳方法可能因实验设置和样品特征而异。

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