多乐的妈妈
龙大人驾到
构建过氧化氢诱导细胞衰老模型的方法如下:
1.细胞培养:选择需要研究的细胞株,并在培养皿中进行细胞培养。
2.添加过氧化氢:在培养液中添加适量的过氧化氢(通常为200 μM),然后用于刺激细胞4小时。
3.细胞观察:在刺激后1天,观察细胞的生长情况,并进行相关的实验操作。
对于b-半乳糖苷酶未染上色的情况,可能是由于染色方法不正确或染色时间过短造成的。也有可能是由于细胞衰老的过程影响了b-半乳糖苷酶的表达,导致无法正常染色。
毛利小五郎的徒弟
可以延长刺激时间,模型好构建一些。
balalaLy
衰老模型构建失败的原因可能是过氧化氢本身不稳定,或者是浓度和作用时间不合适,可以试一下低剂量长期培养。此外b半乳糖甘酶染色确实也不好染。
多乐的妈妈
请问HUVEC需要提前饥饿吗?我的过氧化氢用完全培养基稀释没去血清,不知道是否需要去血清?
loveliufudan
过氧化氢(H2O2)诱导细胞衰老模型通常是通过长期暴露细胞于H2O2以模拟衰老过程来构建的。您提到的实验条件,即使用200uM的H2O2刺激细胞4小时,再培养24小时,是构建过氧化氢诱导细胞衰老模型的常用方法。
需要注意的是,在实验前需要确保细胞处于足够的健康状态,以保证H2O2刺激后可以真正诱导细胞衰老。实验时,可以先种植细胞于培养皿中,然后添加200uM的H2O2刺激液,刺激4小时,再进行培养。最后,您可以通过常见的衰老标志物,如细胞形态变化、DNA损伤、信号传导紊乱等,来验证该模型的成功性。
关于您的b-半乳糖苷酶未染上色的情况,可能是染色条件不适当或技巧不当造成的。建议您检查染色前的细胞处理流程,确保细胞在染色前处于适当的状态,并仔细阅读染色方法的说明,以确保正确操作。
多乐的妈妈
非常感谢您的回答,我就是提前一天铺板,24h后给200uM的过氧化氢,4h后去掉药物。我想问您过氧化氢是否是用完全培养基稀释?还有对于脐静脉内皮细胞代数有什么要求?是否可以用CCK-8验证细胞活力,多谢指教