小片段DNA50-60bp左右，用酶切法构建质粒，有什么缺点？比如酶切，回收，纯化有什么限制，相较于300bp以上的来说？

小片段限制很多，首先酶切不均匀就不好切，还有就是片段小跑胶不容易跑出来，回收也很容易漏掉，建议你在片段左右两边添加一些序列

单酶切重组DNA的弊端主要是可能会发生自身环化现象。

避免自身环化的方法：可以选择双酶切。