丁香实验_LOGO
登录
提问
提问
我要登录
|免费注册
丁香通

对鼠脾脏中提取的T淋巴细胞体外培养有些疑惑想要求解答

user-title

玺月洛离

鼠脾脏CD4+T细胞提取后体外培养要怎么提高其存活率,是要特定的培养基,还是要特定的操作?

如果我要做药物对T细胞的毒性试验,文献中是说对静息细胞加药后培养一定时间,那么是表明我可以不用加anti-CD3和anti-CD28么?

wx-share
分享

3 个回答

user-title

dxy_9f0d5rr

有帮助

我觉得应该用特定培养基,可以使其更好的被保存以供适用

user-title

玺月洛离user-title

现在就是每个文献培养基都不太一样,不知道什么东西要加进去是最合适的

user-title

灵枢天问

有帮助

一般都是1640加血清用就可以了

user-title

玺月洛离user-title

但是这样子的话不会出现细胞存活率很低的问题么,那样子后续实验没法进行

user-title

毛利小五郎的徒弟

有帮助

分离时,我现在把所有细胞操作都在冰袋上进行,离酒精灯也保持一定距离,防止温度过高,

影响细胞状态和各种酶活指标。再上流式测凋亡检测刚分离下来的细胞,跟以前刚分离下来的相比,发现死细胞减少到了8%。但是培养24h后,还是有40-60%的死细胞。培养24h出现问题,我觉得考虑的点应该是培养条件,但是老师还是觉得是分离下来的细胞状态不好。后续应该还会再优化分离步骤。

另一个是培养方面,我换成了无谷氨酰胺的PRMI 1640培养基,谷氨酰胺是培养时加入。也加了IL-2,发现是有改善的。但是用量不敢超过常用量。现在已经用到40ng/ml了,不敢再增加了。

user-title

玺月洛离user-title

可以详细把你的培养基配方跟我说一下么,因为我这几天看的文献里面配方都不一样,有的是RPMI中加了HEPES,2-巯基乙醇,谷氨酰胺,丙酮酸钠等很多东西,有的就是RPMI加了胎牛血清就直接用了。所以想参考一下你的可以么?

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序