PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因一般是什么呢
生如夏花zzh
分享
5 个回答
天一湖医者
有帮助
PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。
其对策有：①必要时重新设计引物；
②减低酶量或调换另一来源的酶；
③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数；
④适当提高退火温度或采用二温度点法（93℃变性，65℃左右退火与延伸）。
balalaLy
有帮助
1、引物特异性不高，重新设计引物
2、体系中各成分不合适，引物浓度和酶的量高了
3、退火温度适当调低
bamboopiggy
有帮助
引物的非特异性结合，你可以考虑提高一下annealing temperature试试。
汤姆卜丽波
有帮助
引物和模板互补性不高，然后退火温度高一点，pcr次数可以少一点
未来9
有帮助
最常见的2个原因如下：
1 引物设计不合理，通常是特异性不佳，导致PCR时在退火阶段，引物结合到多个基因位点上了。
2 还是引物，如果非特异性扩增的条带分子量非常小，有可能是引物二聚体。产生的原因是引物过量了，或者引物自身形成了配对，结果在PCR过程中互相结合、扩增。
还有几种可能的原因：
1 聚合酶的量太多
2 扩增的循环次数太多
3 模板被污染，PCR体系被污染，例如引入了其他DNA成为模板。
提问
扫一扫
实验小助手
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序