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nlrp3炎症小体刺激后,裂解细胞并离心,在不溶物无法吹散的情况下进行交联,对最终结果有影响吗?
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一般做蛋白的寡聚化,用交联的方法,可以分为In vivo 和in vitro两种情况。
in vivo:用Cross-linker(such as DTSSP)处理细胞一定时间,如果你的蛋白是寡聚体形式存在,它可以把你的四聚体交联在一起,那么用不含DTT的裂解液收集细胞,然后跑胶,western,你可以看到在分子量4倍的地方有条带,设好各种对照,你可以判断出那是不是你的四聚体形式。这里就讲个原理,具体的方法,你用交联剂去搜索google,比如用DTSSP可以得到很多protocol
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会有影响,可能会导致阳性率不足