sophie777 请教下！有谁知道蛋白酶抑制剂是和刺激因子一起加到细胞里还在加刺激因子之前加？kern6549 刺激前1小时加。zhaozhuozhao 请教楼上，抑制剂在刺激前1小时加后，再单独加刺激还是抑制剂与刺激同时再刺激啊？谢谢kern6549 1小时后直接加刺激剂就可以了。不要换液。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongc ...

jingyue777 我最近做了变形链球菌超声提取上清蛋白的实验，离心后取上清，测定蛋白浓度为0.81mg/ml，我想请问有没有哪位做过类似的实验，如何判断超声破壁是否成功？一般提取的上清蛋白浓度为多少是正常的？谢谢woxingwosu 没有做过变形链球菌，只做过大肠杆菌的，不知道是不是一样的道理。在大肠杆菌中，只要超声到看起来超声液黏着（效果好可能会澄清）就算是可以。不过这个浓度是不是有点低？或者你的超声液加得比较多所 ...

allenylq 各位战友，最近投了一篇文章，reviewer的提了一个意见：“Antibodies to GPCRs are notoriously unreliable, and this data would be strengthened by further demonstrating presence of the receptor message in this cells , and/or showing specificity of the antibody used.”我是用western blot检测该受体的 ...

zitong1983 如题，近期可能研究某基因3’-UTR对mRNA稳定性的影响，有没有软件或者在线工具可以预测与3‘-UTR结合的protein？谢谢freecell 参考此文： http://www.springerlink.com/content/q877h6000762p0h2/#section=794249&page=1zitong1983 freecell wrote:参考此文： http://www.springerlink.com/ ...

cdduanshui 谢谢斑竹和各位老师一直以来的帮助，在你们的帮助下我少走了很多弯路，还是提一个可能内行人会觉得很傻的问题：ras通路激活后最终是作用在哪里?就如这张图片上，如果是激活抑凋亡，那细胞是通过什么方法来抑制凋亡的？书上只讲了细胞质机构的改变，不是很明白。就比如说会不会最终作用于微丝或是微管等细胞骨架的?或者还有那些所谓的细胞质机构？麻烦老师讲一下，谢谢吴佰霖 的确，目前很多信号通路图能把一个完整的关键分 ...

已寒 我现在在做beta-catenin的western blot，用的是ABCAM的抗体,但是做出来的beta-catenin总是有两条条带，想请教一下各位，beta-catenin有分不同亚型么？或者有磷酸化或非磷酸化之分么？还是有别的原因？感激不尽！！zqm1115 请问你是在做干细胞相关研究吗？已寒 不是干细胞，是一株肿瘤细胞keavin521 不是高手， 说说我的看法1。 2个bands 出来也没关系， 在你要的分子量（85kd？)的地方的有 ...

zcx7792 哪些人和小鼠的肿瘤细胞系表达TLR4,MYD88,TBK1？哪位高手知道？不甚感激。zcx7792 自己顶一下lagopsis SKOV3livelyding 胰腺癌细胞株zcx7792 非常感谢二位本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

amei19872010 紧急咨询请哪位大虾帮我区分一下这几个词肿瘤标记物基因诊断标记物探针标记物woxingwosu 肿瘤标记物：肿瘤细胞产生和释放的某种物质，常以抗原、酶、激素等代谢产物的形式存在于肿瘤细胞内或宿主体液中，根据其生化或免疫特性可以识别或诊断肿瘤。肿瘤细胞的生物化学性质及其代谢异常，因此在肿瘤病人的体液、排除物及组织中出现质或量上改变的物质，这些就是肿瘤标记物。包括甲胎蛋白（AFP），癌胚抗原（CEA） ...

zoufly 初步实验知道了药物对细胞的增殖有抑制作用，接下来如何知道药物对细胞的这种作用是通过信号转导的哪一条通路发生作用的？是不是先用通路的信号转导的工具药先实验的？然后再做磷酸化蛋白的表达？如何是这样的话，哪里可以找到比较全的工具药名字？（是不是要激动剂和拮抗剂一起使用）。zoufly 怎么没有人回复，指点我一下？ronaldo_zj 楼主您好，我也是做药物对肿瘤细胞的增殖抑制作用的，对于您的问题，我有以下理解：1.既 ...

baibai17 今天开题，导师问了个问题：ki67为什么叫ki67？当场傻住······恳请各位老师指教！谢谢。keavin521 The Ki-67 protein was originally defined by the prototype monoclonal antibody Ki-67 (Gerdes et al., 1983),which was generated by immunizing mice with nucleiof the Hodgkin lymphoma cell line L428. The name is de ...

caoyu19841026 请问哪位做过大鼠活体内行RNA干扰（最好是针对血管内皮），具体步骤是？有没有好的公司可以推荐？谢谢。我的邮箱是caoyu1379934@sina.comfreecell 自己检索一下。此类文献汗牛充栋： http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16725144caoyu19841026 谢谢指点！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都 ...

cdduanshui 收缩环：在有丝分裂后期中轴附近形成的激动蛋白质纤维环，负责将子代细胞分开。我也看来一些关于胞质分裂和F-actin的一些文献，但由初涉这一方面，有些英文也看得不是很明白，心里有个疑问请教各位老师;由actin形成的收缩环是不是有一面附着于细胞膜上，另一面连着myosin，然后由myosin提供动力把胞膜往里拉?麻烦老师解答下，谢谢cdduanshui 顶一下，希望老师们帮助woxingwosu Co ...

manlyboy 各位战友，由于实验需要；急需人甲状腺癌细胞株：我查到的国内的细胞库里面有的就SW579（人甲状腺鳞癌细胞株）和TT细胞（人甲状腺髓样癌细胞），有点儿贵，还没买。不知道各位战友有没有养人甲状腺癌细胞株的？其他的人甲状腺癌细胞株也行，越多越好。因为实验中还要对细胞筛选，看哪株细胞能够符合下面实验的要求。如果有，可以联系我，最好是北京地区，方便快捷，非常感谢。无论是购买或是合作都可以，我们这里也有我们实验室主 ...

zuoliping 急切求助：因为有在文献查到PIK3/AKT与我要做的一个蛋白的表达有关，我想做这个通路的抑制剂与这个蛋白的表达的关系，看是否有时间和剂量的依赖性。但是抑制剂的说明说对这个剂量的范围很大，有查文献，在不同细胞中取的浓度组都不太一样，我想知道这些不同的浓度组是怎么确定的呢？要做MTT吗？希望大家不吝赐教！不甚感激！happytears 当然要做多次预实验了，做之前你需要大量阅读文献，看别人做过的你这种细 ...

zhanghai123 大家好！我最近在做一种GPCR的信号通路的分析目前能够确定的是我的这种受体在我所用的细胞系中是与Gαi相偶联，以前公认是与Gq相偶联，然后我用H89处理细胞，确定PKA 参与其中的调控。可是，我用环腺苷酸环化酶抑制剂SQ22536处理，却没有发现能够干预这条通路。目前公认的PKA是cAMP依赖的一种激酶，可是现在的结果却是矛盾的。我想问一下大家：是否存在不依赖cAMP的PKA的活化方式？谢谢！ ...

hp26695 转录因子只结合在DNA正链上，不结合在互补链上吗？谢谢我做启动子区多态性分析，发现T-C碱基转换后用软件预测发现在正链上无转录因子结合位点，对应的互补链上有woxingwosu 有这么一说吗？转录因子识别的位点应该可以是双链DNA吧?主要还是结合在有比较大的凹槽部位使得蛋白有空间进入结合区域就可以了。吴佰霖 与基因的转录方向一致但是记得双链是互补的，本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资 ...

两只小密封 不好意思，刚开始新的研究方向，涉及到要用基因敲除小鼠模型。有若干不懂的名词求助：除题目上的问题外，还有类似Egr2 f/f CD4 -/- (右上角的f和-分别代表什么意思呀？有时候还是+/-)。不知道我得问题大家看懂了没有。。。。。实在是汗。在线等答案。谢谢啦！！laddcat123 Egr2 f/f CD4 -/-:f代表是条件性沉默，利用Cre蛋白可以使其沉默-当然就是不表达woxingwosu 补充一下，cre-loxp是目前比较常用的基因敲除的办 ...

hddking 从某信号通路中间阻断，然后看一下阻断前后细胞蛋白质组学变化（打算用双向电泳研究），可行吗 ？freecell 你的研究目的是什么？hddking 看阻断前后蛋白质组学变化woxingwosu 应该是可行的吧hddking 信号从中间阻断的话，这个个信号发挥的功能是全被阻断了，还是部分阻断？吴佰霖 hddking wrote:信号从中间阻断的话，这个个信号发挥的功能是全被阻断了，还是部分阻断？对，特别是注意是否有旁路相通，否则实 ...

wyj2002 低氧诱导因子-1 是一种核转录因子，看到有些文献直接抽胞浆蛋白进行实验，请问有经验的朋友，是抽取胞浆蛋白还是核蛋白？先谢过了！xhjggl 可以用胞浆蛋白和核蛋白提取试剂盒，确定其在胞浆和核中的的分布情况，也可能是在胞浆中合成再进入细胞核中的，上海生工就有这样的试剂盒卖。细胞核蛋白/浆蛋白抽提试剂盒Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit产品说明：本试剂盒用于从哺乳动物组织 ...

suleipang 本人是研一的学生，还没有进过实验室。如果发现某肿瘤组织中某基因突变，那么使用什么样的方法能够证明某基因突变与肿瘤发生是否相关？希望前辈们不吝赐教，谢谢wales127 要知道你这个基因是否有过报道和肿瘤发生相关？ 如果是与肿瘤发生相关1，简单的就是检测下该基因下游的蛋白表达是否异常，这些下游蛋白如果有变化，需要在细胞水平证明其特异性2，再稍微复杂点的话，构建一个突变的转基因载体，利用组织特异性prom ...