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【求助】质粒丢失相关问题

brucewu1986 我挑的阳性克隆(已检测),在加有抗生素的摇瓶中培养后,放在4度冰箱一天,枪头蘸取少量,6ml加相应抗生素管摇过夜,菌液浑浊,kit小提,测浓度约150ng/ul,但电泳检测看不到条带,酶切电泳也看不到,会不会是质粒丢失?但为啥可以在抗生素的培养基中生长?目的片段2.5kb,载体6k各位战友有没有遇到这种情况woxingwosu 我觉得一般情况下,质粒丢失的几率比较低。你是怎么检测阳性克隆的呢?如果是菌 ...

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【求助】请教:RhoGEF和RhoA有没有什么关系的?RhoGEF到底是个什么东西

cdduanshui 请问各位老师:RhoGEF和RhoA有没有什么关系的?RhoGEF到底是个什么东西,也是小G蛋白的一种吗?只知道它叫RHO型鸟嘌呤核苷酸交换因子,刚刚接触这方面的东西,请老师点拨一下,不胜感激。cdduanshui 求教求教!cdduanshui 在顶一下,老师帮帮忙woxingwosu http://www.scitopics.com/Rho_GEFs.html本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的 ...

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【求助】外显子剪接沉默子怎么解释?

jiajiawonder 综述要用到这个 外显子剪接沉默子 可是不知道怎么能用简单明了的词解释清楚,求助高手~多谢~shilei5794749 Exonic splicing enhancer (ESE)An exonic splicing enhancer (ESE) is a DNA sequence motif consisting of 6 bases within an exon that directs, or enhances, accurate splicing of hetero-nuclear RNA (hnRNA) ...

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【求助】请问人或鼠的内源性siRNA表达谱可以查到吗

waterbeijing 请问能从网上在线查到人或鼠的内源性siRNA表达谱吗,多谢版主zhujoker留言:人或鼠的内源性siRNA表达谱 是你自创的吧?是什么意思啊?问问题怎么也不表述清楚?waterbeijing sorry, I mean whether there is some database or any research detecting expression profiles of endogenous siRNAs (endogenous-small-inte ...

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【求助】问下荧光素酶pGL3上构建3‘UTR的问题

riset 看了一些文献,常用的荧光素酶质粒是pGL3,但是这个质粒图谱上,荧光素酶下游只有一个XbaI的酶切位点,不是多克隆位点,请问是如何解决克隆片段顺序问题的。谢谢。shilei5794749 用你序列的特异上游引物和RVprimer4,正向连进去菌P能扩出条带;反向连进去的扩不出条带。riset 多谢指教,另外再问下,UTR一般都比较长,不能全部克隆,一般克隆多长合适呢?还有就是PCR扩增UTR的时候是以基因组为模 ...

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【求助】分子机制研究方法

yixhchen 发现一个基因在某肿瘤细胞系中表达下调,下一步若做机制研究,可用哪些方法?新手,请各位高手多指点!yixhchen 没有人帮忙吗?提供一个方向就行了,不需太具体。woxingwosu 我来说说看:首先,确认是蛋白质水平的下调还是mRNA水平的下调,可以通过western blot和real time RT-PCR来初步确认一下。如果是mRNA水平上就出现下调,那么比较有可能的是这个基因是受这个癌肿瘤的某个信号通路或者是 ...

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【求助】谁能解释我自噬研究中的奇怪现象

hupengfei5566 各位大虾,我最近在做K562自噬方面的研究,但是几次Wstern Blot结果跑下来我发现一个很奇怪的现象,就是我的未处理组的K562细胞的自噬水平波动很大。按理,正常水平下自噬水平应该是比较低的,但我做的结果中第一次结果比较好,后几次发现未处理组的细胞自噬水平也很高,就好像诱导了一样,LC3-Ⅱ的表达水平比LC3-Ⅰ还要高,我在附件中放了3次的实验结果,第一孔就是我的未处理组。请高手指教。不 ...

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【求助】请教如何判断一段序列是否可能为microRNA前体呢?

AlloY 用什么办法能预测出来呢?谢谢!shilei5794749 UCSC genome browser - genes and gene predication tracks - sno/miRNA trackDescriptionThis track displays positions of four different types of RNA in the human genome:precursor forms of microRNAs (pre-miRNAs)C/D box small nucleolar RNAs (C/D b ...

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【求助】急!!请教一下原核细胞表达的蛋白有活性吗

xxzjcg 大多数人认为原核细胞表达的蛋白没活性,但我最近看了篇文献原核细胞表达的蛋白有活性,并应用于炎症肠病的治疗,请教一下原核细胞表达的蛋白有活性吗lmnsmu 这个问题不能绝对的看待,需要一分为二。原核细胞表达的原核蛋白肯定有活性;对真核蛋白用原核体系进行表达,一些结构简单的、能够可溶表达的蛋白进行简单的尿素梯度等处理后就可以具备活性;而结构复杂、以包涵体形式表达的最初表达的蛋白没有活性,需要进行特殊的复性 ...

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【求助】STAT1通路的图

fengbozhang 各位大侠:最近投了一个paper,是关于一个细胞因子激活STAT1通路,抑制ERK1/2通路而抑制肿瘤细胞生长的。老外的回修意见中,要求我做一个简单的小示意图,来说明作用信号传导通路。本人检索众多文献,发现无论STAT1还是ERK1/2,都很复杂,设计到很多的分子、染色体等,这个图该怎么简单说明一下呢?本人是搞临床的,弄这个东西实在很挠头啊!**高招!kern6549 审稿人的意思应该是让你做一个你 ...

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【求助】求助:确定突变点是否被报道

hbglmn 本人进行某个基因启动子的DNA测序,发现一个突变点,但是不知道怎么查是否已经有人发现,恳请各位高手帮忙!非常感谢,因为本人刚从临床过来开始试验,很多东西不明白,请能够详细点说明!woxingwosu 呵呵,那你只能是看paper了,没有其他办法。不过基因的启动子突变研究,除非发现了这个突变真的具有很强的调节蛋白表达的效果,不然我觉得没有必要做下去的。默默默默默 同意楼上的建议!hbglmn 谢谢各位,我问了我们实验 ...

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【求助】能否用ELISA法检测基因突变吗?

1179380155 请问能用ELISA(酶连接免疫吸附)法检测基因突变吗?感激不尽!woxingwosu ELISA-based Ki-ras gene mutation analyses in pancreatic and cholangiocarcinoma cells and tissues.AbstractDetection of Ki-ras mutations is one possible modality for diagnosis of human neoplasms, particul ...

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【求助】请教:myosin 2 和 nonmuscle myosin2有何区别

cdduanshui 请教各位老师,myosin 2 和 nonmuscle myosin2有何区别?有没有人做这个的,能否提供一些资料,谢谢。cdduanshui 自己顶一下,希望各位老师帮忙zhujoker Myosin II (also known as conventional myosin) is the best-studied example of these properties.Myosin II contains two heavy chains, each about 2000 amino acids in l ...

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【求助】G蛋白偶联受体定位错误

rebeccagold 大家好。最近在做建一个高表达某G蛋白偶联受体的CHO细胞株,载体是pEGFP-C1。稳定筛选后,细胞的荧光表达很好。但奇怪的问题是,该受体定位出现了问题。原本该定位在膜的G蛋白偶联受体,现在基本上呈全细胞分布,而且核尤其亮。百思不得其解。请各位战友指点。附图为该细胞的Confocal图,没有染核。多谢大家啦!woxingwosu 呵呵,你的confocal照的效果很不好呀。不过确实可以看到其定位主要 ...

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【求助】G蛋白偶联受体定位错位

rebeccagold 大家好。最近在做建一个高表达某G蛋白偶联受体的CHO细胞株,载体是pEGFP-C1。稳定筛选后,细胞的荧光表达很好。但奇怪的问题是,该受体定位出现了问题。原本该定位在膜的G蛋白偶联受体,现在基本上呈全细胞分布,而且核尤其亮。百思不得其解。请各位战友指点。附图为该细胞的Confocal图,没有染核。多谢大家啦!kern6549 会不会是该受体带上了EGFP后无法定位到膜上了。rebeccagold 谢谢 ...

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【求助】关于microRNA测定问题

紫石榴 最近在研究心肌缺血对某microRNA的调控,有文献报道在原代细胞中随时间下调,我用的是H9c2心肌细胞系做的,想做个验证,顺便找最佳干预点。考虑经费问题,所以先用RT-PCR的方法做趋势,再上real time。我是提取总RNA,定量后(量和纯度都还好),用过茎环引物逆转录,再PCR电泳的,但做出的结果与设想趋势不符,且重复性很差,不知道哪里不对。麻烦高手指导下。版主zhujoker留言:RT-PCR这种半定量是不 ...

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【求助】菜鸟求助:如何加阻断剂

miaoduan 刚刚开始做信号通路,激活和阻断后测相关分子1、阻断剂配成需要浓度,加入六孔板,一小时后把所需激动剂贮存液直接加到六孔板中(感觉这样会浓度不均),24小时后检测2、阻断剂配成需要浓度,加入六孔板,一小时后去除,配好同时含有阻断剂和激动剂的工作液,加入各孔,24小时后检测3、阻断剂配成需要浓度,加入六孔板,一小时后去除,加入配好的所需浓度的激动剂工作液(不含阻断剂),24小时后检测不知说清楚了没,这三种方法 ...

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【求助】用什么培养基稀释siRNA和脂质体

cxm_7910 我是第一次作RNA干扰。我用1640培养基培养贴壁细胞,但RNA干扰试剂说明书上说最好用OPTI-MEMI低血清培养基来稀释siRNA和脂质体。请问可以用1640稀释吗?干扰后什么时候测mRNA和蛋白含量?谢谢!霍一刀hxs 最好用OPTI-MEM。瞬时转染,一般48小时之后检测。teagerxl 用1640无血清转染也可,刚开始做可以做一个时间梯度。mRNA和protein不同步。cxm_7910 谢谢!本文 ...

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【求助】allele specific expression (ASE) assay

youyoubantang 想请教各位大侠,等位基因特异性表达分析:allele specific expression (ASE) assay 到底是什么,他的原理及操作步骤是怎样的,特别是原理,一直搞不明白还有就是他怎样验证cis-eQTL 的真实性shilei5794749 DOI 10.1016/j.cell.2010.09.049 看这篇文章!讲 long-noncoding RNAs 中 Jpx 调节 x chromosome inactivation 的。里面有 allele sp ...

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【求助】我在genebank提交核苷酸序列遇到困难,请求帮助

har1224 我在genebank提交核苷酸序列遇到困难,请求园内老师帮助,自己花费很大精力,可是还是存在问题。 Do you know the correct annotation for your sequence(s)? If so,please resubmit your sequence(s) with relevant features such as:- coding regions (CDS features) including nucleotide spansand reading frame. Using t ...

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