Nature 3 月 3 日这期文章中报道了一款动物实验研究设计校验工具（EDA, Experimental Design Assistant）。 它能帮你干嘛呢？ ● 创建实验流程图 ● 准确算出样本量 ● 发现你实验设计中的缺陷 ● 给出实验设计优化建议 软件的发明研究者 Nathalie Percie Du Sert 是一位实验设计专业人员，她指出，以往研究者们都是到了论文评审阶段，才被审稿人挑出实验设计方面的问题，然而这对研究人员来说，为时已晚。 她发明这个工具，就是为了帮助研究人员们及早发现问题，解决问题，更希望标准化的实验设计流程，能纳入动物实验发表规范当中。 尽管市面上有 P 值校验工具，临床研究方案校验工具，但 EDA 是目前唯一一款校验动物实验研究设计的工具。 工具基于网页开发，免费开放使用。英国剑桥的一家基因研究中心全面给员工普及 EDA 的使用，并提供内部培训。 官网上也有 EDA 的详细使用说明以及视频教程。 还等什么？赶紧去试试。

你是不是因为细胞污染影响实验进度而郁闷，还因此被老板批评？可以说，大家都是抗污染过来的，心态要好，不会是第一次，也不会是最后一次，随时做好细胞被污染的准备。 今天我们就来备战：是不是细胞污染？是哪种细胞污染？如何识别？ 细菌污染 细胞中如果污染细菌，最常见的有枯草杆菌等革兰阳性菌以及大肠杆菌、假单孢菌等革兰阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。培养细胞受细菌污染后，会很快出现培养液变混浊，pH 改变。 也有少数培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。所以，每天应仔细观察。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成实验失败和细胞株 (系) 丢失。 细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。 如何预防 ● 仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够、压力足够。 ● 重点检查和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意。 ● 下次使用前检查一下

算算今年，总共有 11 个日本人获得诺贝尔物理奖。日本的物理科研这么强，对我们做生物科研有何借鉴呢？ 在我的研究生期间，辗转于北大，日本 KEK，和美国的 BNL。接触了三个不同地方的科研环境，相差还是非常的大。北大实验室给我打下扎实的基础，在日本 KEK 学到了努力和坚持是多么得重要，美国 BNL 给了我充分的自由和想象的空间。 1. 日本科学家每天亲自做实验 我在研二的时候去了日本 KEK 的国际直线对撞机部，参与超导加速器的预研。野口修一博士是我当时的导师，他是日本超导加速器的领军人物，ILC 加速器原件部的头。 那个时候导师已经 60 多岁了，每天亲自下到实验室，参与拧螺丝这样的事情。对于我来说是震惊的。这个级别的科学家无论在中国或美国早就脱离了实验室，坐着申请钱，或四处开会的事情。哪怕现在我这么低级别的科研人员，毕业 4 年后，一半的时间都是写提案，开会，讨论，协调工人和工程师的工作。 导师早上比我到得早，晚上比我回家晚。早上从 8 点干到凌晨 1 点。不止是他，在晚上 8~9 点我回宿舍之前，KEK 的加速器大

我和夫人多次成本申请到 2005 年的国家自然科学基金（以下简称国基），要感谢从丁香园学到的「独家秘笈」的成功应用。为了感谢丁香园，我们呕血力创，推出我们的秘诀，提供给正在奋斗的人们。 一、审时度势 所谓审时度势，关键在于要搞清楚基金究竟要赞助哪些人，一般来说，国家设立基金，目的就是赞助那些能够在科研上有突破的人。判断哪些人能够在科研上有突破，这个就依靠评委来判断了，要知道国基从来不会雪中送炭，只会锦上添花。 你要申请，首先要想，假如你是评委，你写的这封标书送到你手上了，让你来判断是不是会有突破性成果，你怎样来判断？ 你肯定说看工作基础，对了，这几乎是肯定的。就是一个申请青年基金的人，尽管不是很强调工作基础，但你想，现在评委的手里绝对不是就你一个基金标书，现在哪个角落、哪个地方，可以说只要是人都在想办法申请基金，标书多的吓死人。 评委不可能看到是青年基金，就不看工作基础了。所以不要认为申请青年基金，就可以不在工作基础上下功夫了。 那么，问题来了，如何在工作基础的书写上下功夫？或者说如何让评委一看就知道

几乎每个做实验的朋友每天不知道要离心多少次，其中有一步配平，你真的会吗？现在考你一个问题，多半会答错。 给你 n（n 取值为 1-24）个离心管，每个离心管内液体一样。这 n 个管都需要离心，且没有额外的配平管，有一个 24 孔离心机，请问 n 有多少种情况下不能离心？ 相信大家使用离心机时，都会遇到这样的问题：需要用 24 孔离心机离素数个管子。一般的做法是要再取一个离心管加水称重配平，这有些麻烦。 偶数个 自然，偶数个管肯定能配平，堆成放两边，所以偶数就不用考虑了。 奇数个 奇数个管中，自然 3、9、15、21 都能配平。但是剩下的奇数中是否就不能配平了呢？ 答案揭晓 除了样品数 1 和 23 外，都能够配平。信不信看下图，涂黑的圆代表放了样品的孔，以下的数目都是能配平的。 剩下的样品数的配平方式也在上图中，只要把上图中空心圆看成已放样品的孔，比如 13 个管子配平方式对应上图 11 个样品数（如下图），14 对应 10，15 对于应 9，依此类推。

有很多人在论文写作方面遇到了问题，基本不外乎以下几个方面。因此我们针对这些问题做了一个细致的总结，按下面这七个方面逐个展开。敬请关注。 投稿前准备工作和需要注意的事项、投稿过程相关经验总结 ● SCI 期刊投稿各种状态详解及实例综合（学习各种投稿状态+投稿经历总结） ● 问答综合篇（是否催稿、如何撤稿、一稿两投及学术不端相关内容等） ● 如何处理审稿意见（回复意见、补实验、润色、重整数据、作图及调整、申辩及其他） ● Reject 或者 Reject and resubmit 后的对策和处理 ●稿件接受后期的相关问题（作者信息、地址版权、单行本、彩图费、版面费、如何汇款、清样相关等） ●进阶篇（如何选投 SCI 杂志、各专业方向期刊选择、SCI 写作经验） 1. 第一作者和通信作者的区别 通信作者（Corresponding author) 通常是实际统筹处理投稿和承担答复审稿意见等工作的主导者，也常是稿件所涉及研究工作的负责人。 通信作者的姓名多位列于论文作者名单的最后（使用符号来标识说明是 Correspo

根据自己的实验体会，总结做好 WB 的一些心得，希望对你实验有帮助。围绕着实验的每个步骤展开叙述，这样可能更具体更好理解。配胶该部分较为重要的是配制凝胶时要充分混匀，此外应保证试剂的新鲜。常出现的问题有：A. 凝胶出现花纹：此时应检查原料中过硫酸铵（AP）粉末是否受潮。B. 凝胶聚合时间较长：聚合时间由 AP 以及 TEMED 决定，通常在 30 min 左右，AP 不新鲜会导致聚合变慢。此外还需注意环境的温度也很重要，气温较低时胶是会凝得慢一些，必要时可适当增加 AP 以及 TEMED 的量，但通常不会超过 1 h，若超过 1 h 甚至更长仍未聚合，应检查配制的操作有无错误。处理蛋白样品该部分蛋白样品本身很关键，若蛋白提取过程存在问题或蛋白发生降解则很难进行好之后的实验，也就很难做出好的结果了。除此之外 loading buffer 的作用也不容忽视，切莫使用不新鲜的上样缓冲液，同时在处理时将样品与 loading buffer 混合均匀也应注意。电泳首先在跑积层胶时应尽可能使样品压齐，若上样量较大（如细胞蛋白通常上样在 20-30 甚至 40 ul），可适当减小电压跑 20-30

师兄大讲堂开课了，今天我们从问题最多的文献管理和检索开始。 神器 EndNote 要这么玩 讲到文献管理，第一个要讲的必定是 EndNote。 在这儿，不再讲述 EndNote 的具体使用方法，相信很多小伙伴们都已有所了解，对于还不甚了解 EndNote 的同志，可以在网上搜索下教程，灰常多。 在正式开搞之前，首先说明下这回我们要用到的软件：EndNote X6（第 16 版 ）和 Word 2010。 与其说 EndNote 是文献管理软件，倒不如说它是「参考文献」管理软件。 因为大多数小伙伴，还是拿它「插文献」。 想插出一手好文献，就要先从导入题录开始 将题录导入 EndNote 的方法有很多。 像什么，从数据库网站导入、直接导入 PDF、Online Search 和手动输入等等。 对于仅仅进行参考文献管理的话，我建议使用 EndNote 的 Online Search 功能。 如上图，在左侧 Online Search 栏下选择

实验室里有很多非常容易学会并且不太被重视的小技巧，可以提高你的科研效率。霸霸会定期推荐 10 条，千万不要走开，锁住生物学霸频道。 1. 封口膜剪了以后直接拉伸使用（保护纸会在拉开后分离），这样就不需要抠开了。实验室内请带手套操作，以上是为了拍照才未使用手套。 2. 鱼缸潜水泵做回流冷凝的循环水泵，加氧泵用来做过柱的加压泵。这个过柱指的是硅胶/氧化铝柱层析，不是指葡聚糖柱等其他类型的柱子。 3. 带验钞功能的手电筒可以用来过染料（便宜、比便携紫外灯耐用，但是功率不够，波长不可调）。过染料是指，进行染料的柱层析，在手电筒的激发下部分染料可以发射肉眼可见的荧光，所以可以直接指示。但是不代表所有的染料都可以使用这个方法，目前使用过的体系，荧光素、罗丹明、BODIPY、芘/苝类。 4. 枪头 + 胶帽 = 玻璃胶头滴管，枪头还可以作气管的缩小器（要求气量更大时替代针头）。枪头可以充当药勺。一次性塑料胶头滴管剪开也可以充当药勺。 5. 甲基硅油不够时可以滴部分到水浴锅上形成油膜，防止水在 70-90 度蒸发，使水浴锅可以

SCI 论文不好写，主要障碍在英语上，其实就像以前考四六级考研一样，撰写也是有规律可循，有模版可靠。 Abstract 越简单越好，字数控制在 150～250 words。 具体怎么写呢？先简单描述一下课题的前沿背景，然后引出自己的实验（In this paper…. or Here, we…）主要陈述实验结果，可稍带提一下所用到的重要方法的名称，然后说明你的结果的意义 These data suggest….；最后总结拔高 In a word…. or In summary…..。 举个栗子： [Background]Acetolactate synthase (ALS) is the key enzyme in isobutanol biosynthetic pathway. Efficient expression of ALS is of great significance for the regulation of isobutanol metabolic pathway. [Methods]The acetolactate sy

2016 年伊始，一年一度的国自然基金申请开始启动了，时间迫在眉睫。你开始准备申请基金了吗？在申请过程中，你遇到了什么困难？ 要想申请这个基金绝非易事，这不是你写了一篇 SCI 论文发到国内什么核心期刊杂志就可以的事。 课程简介 申请基金，你需要明确的两点： 1. 明确基金申请方向 这个取决于你手中可利用调度的资源以及目标基金的资助范围。 2. 明确基金的选题 选自己的「擅长」进行申报、申请建立在既往工作的基础之上、申请放在一个更有实际意义可执行的框架下面，而不是幻想或者遐想。 现在大人们总说，不能让孩子们输在起跑线上。而选题就像站在起跑线上准备开跑的孩子，你愿意让它输在起跑线上吗？选题对了，应该说成功了一半。剩下一半是写作，研究基础，发表文章等。 关于标书的申请，你需要注意以下内容： 1. 标书如人 标题和摘要就像漂亮的脸蛋，要言简意赅，突出研究意义，给评委以清晰、深刻的第一印象；正文就像一个人的躯体，要「曲线分明」，该简练的地方就不要啰嗦，该详述的

日前，《每日邮报》报道了一位得了肝癌的小妹妹。她的爸妈为了能让她一边治疗，一边上学，为她配备了一台未来机器人——「替身」（可怜天下父母心）。 佩顿的机器人代替她重返校园。（图片来源：《华盛顿邮报》） 佩顿通过出现在教室里的机器人和小伙伴们一起上课（图片来源：《华盛顿邮报》） 佩顿通过出现在教室里的机器人和小伙伴们一起上课（图片来源：《华盛顿邮报》） 此事一出，全网哗然。不过如此令人震惊的装备，竟然在丁香园里隐秘了 1 年，要不是因为这次的「替身」门，还不知道要雪藏多久。 既然我厂就有这么个东东，小编竭（ruan）尽（mo）所（ying）能（pao），从 boss 天天那里要来此物体验一番。据说，这玩意儿是天总去年从美国扛回来的，海关都过了，坐高铁时，差点儿被警察蜀黍拦下。这是题外话，不过宝贝到手，小编按捺不住鸡冻的心情想跟大家伙分（an）享（li）此款机器人。 在正式体验之前，需要准备的东西不多，两台 iPad，一台用来充当机器人操控面板，一个用来当机器人的「脸」，随后，分别在这两台设备上安装专用的

很多人研究工作做得很棒，却呈现不好，让原本辛辛苦苦得来的结果没有得到应有的表现。仔细分析 C-N-S 系列的大牛文章，不难发现，这些高水平论文的图表质量也高人一筹。因此，合理的「包装」自己的实验结果非常重要。本文重点介绍图和表的包装，更多包装技巧见原文。 一、图 1. 首先对文章中图片的逻辑关系要十分清楚，针对 results 部分排好序，而且开始的时候要多准备一点图片，挑出几张拍摄效果好的，在投稿的时候，除了你认为最好的那张图以外，还可以放几张备选图到附件中。 2. 图片的排列一定要有逻辑性，不管是从大体形态到分子机制，还是从分子机制再到形态学，不管按照什么方式叙述，都要按照一定的逻辑顺序。 3. 图片要尽量的精美，而且要每组图片要保留几个备用的图片，以免要求修改时，找不到合适的图片。 4. 要注重细节，放在 PPT 上排列时，要注意上下左右的图片尽量对齐，包括用来放在柱形图上的小星号，一定要对齐，放好。 5. 代表趋势变化的图，一定要能看出趋势。不明显的图就不要放在上面了。 6. 如果是大体照片

苯基乙胺结构式 苯基乙胺——让你坠入爱河 PEA 诱发爱情，当你对某人「来电」时，就是血液中 PEA 增加的结果。它实际上是一种人体自然合成的一种兴奋剂，让人产生兴奋感，使人觉得心情愉悦、精力充沛和勇敢自信。在 PEA 的作用下，心跳和呼吸都开始加速，手心出汗，脸红，瞳孔放大。 在面临危险和恐惧时，PEA 也会大量分泌，这就是男孩喜欢约女孩看恐怖片的道理了。虽然 PEA 是在下丘脑中自然合成的，巧克力中也含有不少 PEA，可以说是 PEA 含量最丰富的食物了，怪不得巧克力能荣登情人节最佳礼物的榜首。 多巴胺结构式 多巴胺——传递幸福与欢欣 多巴胺是下丘脑分泌物的一种神经递质，主要负责大脑的情欲、感觉，传递兴奋及开心的信息。当一对男女产生爱慕之情时，下丘脑开始源源不断地分泌多巴胺。在多巴胺的作用下，你感觉爱的欢欣与幸福。但人的身体无法一直承受多巴胺的刺激，因此大脑会调节多巴胺的分泌，让它回到正常水平。 如果你觉得婚姻生活日趋平淡，和你的爱人一起找一些新奇的、兴奋的、充满挑战的事情做—去陌生的地方旅

在学术论文的诞生过程中除了论文作者——高年资与低年资研究人员，还有另外两方面重要的人物——学术期刊的编辑与同行评审专家。本文将介绍这两方面在减少学术论文造假中的作用与漏洞，并简要评论一下当前学术评价体系。 学术期刊的重要性 近代科学研究几乎所有重要的发现与突破都是以研究论文的形式发表在正规的学术期刊上。例如：自然科学领域最高荣誉诺贝尔奖历年获得者的主要贡献均可追溯到他们发表在学术期刊上某一篇或几篇重要的研究论文。 全世界的科研人员都离不开这些学术期刊（或数据库）：一方面他们通过检索与阅读学术期刊的研究论文来掌握最新的学术进展，另一方面他们又把自己最新的研究成果发表在这些学术期刊上供全世界的同行分享。 数以万记的学术期刊组成了一个巨大的、不断更新壮大的数据库，成了人类探索未知世界新知识的记录载体与集散地。 把研究成果以学术论文的形式发表在正规的学术期刊上是科学研究最重要的环节之一，也是广大科研工作者孜孜不倦的追求。 学术界有句俗语叫「Publish or Perish」——「不发表就死亡」，大致意思就是：基础科研

做 MTT 实验容易走弯路。此前我们汇总过部分 MTT 实验相关细节，可点击阅读原文查看。今天继续和大家一起来谈谈 MTT 实验步骤 贴壁细胞相关实验操作 1. 收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入 100 uL 铺板使待测细胞调密度至 1 000-10 000 孔（边缘孔用无菌 PBS 填充）。 2. 5% CO2，37℃ 孵育，至细胞单层铺满孔底（96 孔平底板），加入浓度梯度的药物。原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药。一般 5-7 个梯度。每孔 100 uL，设 3-5 个复孔。建议设 5 个，否则难以反应真实情况。 3. 5% CO2，37℃ 孵育 16-48 小时，倒置显微镜下观察。 4. 每孔加入 20 uL MTT 溶液（5 mg/ml，即 0.5% MTT），继续培养 4 h。若药物与 MTT 能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用 PBS 冲 2-3 遍后，再加入含 MTT 的培养液。 5. 终止培养，小心吸去孔内培养液。 6. 每孔加入 1

复旦大学生物医学研究院王磊教授一直致力于利用分子遗传学手段寻找人类生殖疾病相关致病基因，并利用细胞、动物模型对相关基因功能展开深入的研究，在本次研究中，他利用遗传及功能基因组学手段揭开了人类卵子成熟障碍之谜。 文章摘要 人类生殖繁衍主要依赖于成熟卵细胞和精子融合形成的受精卵，但是阻滞人卵细胞成熟的遗传机制至今未知。 研究人员利用外显子组测序技术对不孕症患者四代家系中的五名成员进行研究，其中三名患者因卵母细胞第一次减数分裂受到抑制而导致不孕。接着对这五名患者及家系中的其他成员，加上另外 23 个患病家系的 DNA 样本，利用 sanger 测序检测候选基因 TUBB8 的突变情况。然后利用 RT-PCR 技术检测卵母细胞、早期胚胎、精子细胞和部分组织中的 TUBB8 和其他 β-微管蛋白亚型的表达。 α-微管蛋白多肽和 β-微管蛋白多肽组装形成异二聚体，研究人员利用实验评估 TUBB8 突变是否影响体外异二聚体组装、HeLa 细胞系中的微管结构、酵母细胞中的微管动力学以及小鼠和人类卵母细胞的纺锤体组装。 结果研究者在灵长类动

我做不出来克隆的时间长达半年，期间克隆实验方面许多问题都遇到过，现在总结主要的一些问题和大家交流，希望大家以后不要犯我一样的错，少走弯路。 1. 感受态要验证 感受态细菌本身有质粒污染，这个问题困扰了我三个月，一直到最近才找到原因，我这里犯了最大的错是没有做过感受态检测。 也许大家奇怪为什么在三个月内的时间里没有怀疑到感受态，不用奇怪，因为感受态「表现的太正常了」，每次涂板都长菌斑，每板 20-30 左右，很正常。 我一个同学用这样的感受态做自己的克隆没有任何问题，得到了自己的克隆。我用这个感受态做 T 载体转化也没有问题，可以得到阳性克隆，因此很难让我想到是感受态的问题。 2. 酶切产物电泳后回收 胶回收试剂盒，我用得是 promega 的，记住酶切产物一定要电泳之后回收，如果直接把酶切产物回收会造成大量的假阳性。这个问题困扰了我半个月。 3. 引物设计要无误 我做的克隆是把大、小两个目的片段头尾相连到载体中，大小片段之间有一个共同的酶切位点，大小片段之间也有一段共同序列。由于引物设计错误，我人为地引入了一个插入突变

学生物，自然就离不开各种生物软件，掌握这些软件的使用是基础。使用过程中，难免会遇到各式各样的问题，如何针对不同软件的特点，择优选用以事半功倍解决问题？鉴于此，特整理此帖，希望对新手有用。 Q1：怎么查找序列保守区？ A1：很多人查找序列保守区，一般通过序列多重比对后，肉眼判断序列保守区，但此法难免太主观，不具重复性，且选择的保守区无法受统计上的显著性检验。其实，实现这一目的，可以使用DnaSP--> 「Analysis」 -->「Conserved DNA region」... 【注】设计简并引物，用此法，简单易用 ，强烈推荐... Q2：多个 FASTA 格式保存的单条序列如何批量快速合并为一个文件？ A2：一条条添加，费时费劲，且容易出错。解决的办法有两个：一是可以通过 DNAMAN 的「多重序列比对」后导出功能，即：添加序列所在的目录，或全选相关文件，进行多重比对，导出 Clustal aln 文件，然后再转换为 FASTA；二是使用我们 2012 年新开发的序列火枪手套件的「Seq Merger.exe」 即可快速实现合并。 Q3：如何解决 Cl

在互联网上，有很多软件可以解决分子生物实验人员在做实验中遇到的问题。本文提供了序列分析、实验设计阶段比较实用的软件。 软件主要用于酶分析、引物设计、同源序列比较、质粒作图、结构域（motif）查找、RNA 二级结构预测、蛋白二级结构 分析、克隆策略图谱、三维结构显示等方面的内容。 1.综合性软件 这类软件要求对本阶段上述的大部分功能均具备，但这类软件大多在专项分析上没有优势。 推荐软件：Omiga 2.0 优点：你所能想到的大部分对核酸蛋白的序列分析功能，它大多具备。而且有很舒适的表达方式。如果你不喜欢装备各种专业性强的软件，而希望用一个综 合性的软件代替的话，就选择它吧。本阶段的大部分功能它都有。 另外，该软件还提供了一个很有特色的类似于核酸限制酶分析的蛋白分析，对蛋白进行有关的 多肽酶处理后产生多肽片段。 缺点：文件实在太大了。要完全下载所有有关软件的话，需 20 多 M ，而且每个功能并不十分完美，只能说可以解决问题。 同类参考软件：DNASIS 2.5 DNATools 5.1 2.限制酶分析