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蛋白互作常用的研究方法

蛋白互作技术蛋白质是生物功能最直接的执行者,虽然一些蛋白质可以独立的完成他的使命,但是大部分的蛋白都是需要一些伴侣分子的协助一起完成任务或者形成复合物之后才能充分发挥他的功能。所以,了解蛋白质与蛋白质之间的相互作用,能够帮助我们更好的了解细胞的生命活性,揭示隐藏在表象下的调控机理。经典的蛋白互作分析研究方法主要包括三个:酵母双杂交、免疫共沉淀、GST-pull down。1. 酵母双杂交技术:主要用来进行互作蛋白的筛选,缺点就是假阳性较高,所以需要进行结果验证,一般可采用免疫共沉淀或GST-pull down实验进行验证。2. 免疫共沉淀:是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内相互作用的有效方法。当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白,那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离,对B蛋白进行Western blot检测,进而证明两者间的相互作用。3. GST pull-dow

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文献解读:母乳喂养对新生儿病毒分步组装的调控

研究简介病毒在健康新生儿肠道中的定植通常发生在出生之后,而在后续不同的环境下,有些病毒的定植会引发新生儿肠道疾病。在过去的数十年中,母乳喂养对婴儿健康的益处在众多研究中得以证明,如增强免疫力、提升智力、减少儿童期肥胖和减少罹患过敏性疾病的几率等,但是对母乳喂养影响婴儿生长与健康的机制仍然知之甚少。2020年4月15日宾夕法尼亚大学佩雷尔曼医学院 Frederic D. Bushman教授研究团队在Nature上发表了题为The stepwise assembly of the neonatal virome is modulated by breastfeeding的研究性论文,该研究揭示了新生儿病毒群落的组装是分步进行的,通过母乳喂养可以调节新生儿病毒的逐步组装,抑制病毒在人体细胞中的定植与发展。研究结果:首先为了研究新生儿体内早期的病毒,研究团队收集了20名健康婴儿不同阶段的粪便样本。通过颗粒富集和SYBR染色,观察到出生后的11-152小时内,17/20的新生儿粪便样本中还检测不到病毒样颗粒(图1a);而1个月大时,大多样本中已经都能检测到,且每克样本中病毒样颗粒数多达1.6 ×

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如何正确的选择摇床振幅?

什么是摇床的振幅?摇床的振幅指托盘在做圆周运动时候的直径,有时候我们也叫“振荡直径”或“轨道直径”符号:Ø。作为标准,Infors提供振幅为3mm,25mm和50mm的摇床。什么是氧气传递效率(OTR)?氧气传递效率是指,氧气从大气中传入到液体中的效率。 OTR数值越高,氧传递效率越高。振幅和转速的影响这两个因素都会影响培养瓶中培养基的混合。 混合效果越好,氧传递速率(OTR)就越好。遵循这些指导原则,可以选择最适合的振幅和转速。一般来说,选择25mm振幅可以作为万能振幅应用于所有培养。正因为如此,大多摇床的振幅都是25毫米。在一些应用中,如果对氧传递/细胞生长有特殊的限制,可能会选择一些特殊的振幅。细菌,酵母和真菌培养:摇瓶中的氧气传递效率比生物反应器低得多。多数情况下氧传递可能是摇瓶培养的限制因素。 振幅与锥形培养瓶的大小相关:大瓶使用大振幅。建议:25mm振幅应用于从25毫升到2升的锥形培养瓶50mm振幅应用于2升至5升的锥形培养瓶细胞培养:_然而,哺乳动物细胞培养对氧气的需求相对较低,较低的功率输入即可。_对于250mL摇瓶,在较为宽广的振幅和振速范围(20-60mm振幅;

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从头测序计算策略中的综合方法

在解决串联质谱图谱从头测序问题的方法中,绝大多数是基于图论的方法,但研究学者们还提出了一些其他的综合方法,包括PEAKS、NovoHMM、UniNovo、Novor等。PEAKS2003年,Ma等人提出了PEAKS。PEAKS是用于解析肽图谱的一个综合软件包,它包含从头测序,数据库搜索,PTM鉴定,同源性搜索和数据分析。在PEAKS方法中运用了一种新的从头测序模型和算法,分为四个步骤。第一步将图谱进行预处理,即图谱噪声过滤和图谱峰聚合;第二步是在简化后的图谱中根据母离子质量列举出所有可能的候选肽段;第三布和第四步为综合打分的差异分析以及分值正则化。NovoHMM2005年,Fisher等人提出了隐马尔可夫模型(Hidden Markov Mode,HMM)。该法对应的软件是NovoHMM。HMM被视为一种解决贝叶斯框架中从头测序问题的新方法。该方法不是对序列的单个信号进行评分,而是将氨基酸的转移概率纳入范围,即某个氨基酸残基跟随另一个氨基酸残疾出现的概率组成的矩阵。在Fisher等人的论文中,他们通过许多例子证明了HMM法比其他流行的肽从头测序方法(如PepNovo)效果更好。UniN

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PRM相对定量技术

平行反应监测( Parallel Reaction Monitor-ing, PRM)是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术,能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质/肽段进行绝对定量。PRM技术首先利用四级杆质量分析器(如Orbitrap系列)的选择能力,用Q1选择目标肽段的母离子;随后在collision cell中对母离子进行碎裂;最后利用高分辨、高质量精度分析器在二级质谱中检测所选择的母离子窗口内的所有碎片的信息。可对复杂样本中的目标蛋白质/肽段进行准确地特异性分析。平行反应监测PRM相对定量技术的优势相比于传统SRM/MRM只检测目标离子对的模式, 平行反应监测PRM相对定量技术将采集二级信息所用的四级杆质量分析器替换为更高分辨、更高质量精度的分析器,实现了从目标离子对检测到全部目标离子碎片检测的转化。因此,平行反应监测PRM相对定量技术不仅具有SRM/MRM的靶向定量分析能力,还同时具备了定性能力。1. 质量精度达到ppm级,能够比SRM/MRM更好地排除背景干扰和假阳性,有效提高复杂背景下的检测限和灵敏度;2. 对子离子

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高脂饲料诱导大鼠建立非酒精性脂肪肝模型

非酒精性脂肪肝(NAFLD)包含了一系列的疾病发展阶段,从一般脂肪变性进展到脂肪变性与炎症并发的非酒精性脂肪肝炎(NASH),随后进展为肝纤维化、肝硬化和肝癌。大多数肥胖的成年人有脂肪肝型态,他们的患病率达到 30% 以上,因此,NAFLD 的患病率会随着肥胖率的升高而升高。 为研究 NAFLD 的发病机制并找出治疗方法,建立动物模型是至关重要的一步。科研人员大多利用高脂饲料诱导大鼠建立 NAFLD 模型,但近几年建立的 NAFLD 动物模型所采用的高脂饲料配方、建模周期均不一致,在研究方面具有不同的参考价值。本文对多种高脂饲料诱导大鼠建立 NAFLD 模型的方法进行总结,如有疑问,欢迎与我们的技术团队讨论。 饲养环境 环境是饲养实验动物的必要条件之一,对于实验动物的成活率有着很大的影响,在相关论文中对温度和湿度几乎都有详细叙述,并强调了它的重要性。考虑到 NAFLD 模型对环境并无特殊要求,所以科研人员一般采取了 22±2℃,湿度 50%-60%,12 小时循环照明的普通饲养环境。 不过值得注意的是,大鼠对于环境的变化很敏感,因此要保证饲养环境各项指标的稳定。同时由于高脂饲料的缘故,

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Label Free非标记定量技术

非标记定量蛋白质组学 (Label Free)近年来成为重要的质谱定量方法,按照其原理进行分类,可以分为两类。Spectrum counts类的非标记定量方法,发展比较早,也形成了多种算法进行定量,但是主要的原理都是根据MS2的鉴定结果作为定量的基础,各种方法的差别在于后期算法在大规模数据上的修正。第二种非标记定量方法的原理是以MS1为基础,计算每个肽段信号在LCMS质谱上的积分,目前Label Free主要的数据分析方法是利用Maxquant软件,根据一级质谱相关的肽段峰强度、峰面积、液相色谱保留时间等信息进行定量分析的方法。蛋白质非标记定量技术(Label Free)是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准,只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据,比较不同样品中相应肽段的信号强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。 Label Free定量优势 就在于蛋白质不需要进行标记,所需样品总量少,耗费低。相比较iTRAQ/TMT等标记方法,Label Free非标记方法具有特定的技术优势:a.检测起始样本量少; b.前处理少,更多保留样本

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PEAKS蛋白质从头测序技术

2003年,Ma等人开发了PEAKS。PEAKS是用于解析肽图谱的一种串联质谱蛋白质组学软件,可用于基于串联质谱的肽测序,蛋白质鉴定和蛋白质定量分析。他们在PEAKS方法中运用了新的从头测序模型和算法,分为四个步骤:第一步将图谱进行预处理,包括图谱噪声过滤和图谱峰聚合;第二步是在简化后的图谱中根据母离子质量列举出所有可能的候选肽段;第三步和第四步为综合打分的差异分析以及分值正则化。PEAKS蛋白质从头测序技术一般通过肽从头测序辅助的数据库搜索来进行肽鉴定。同时,它还通过基于肽序列标签的自动搜索(SPIDER)和PTM鉴定技术整合了PTM和突变表征。 PEAKS可提供各种肽的完整序列,各个氨基酸序列的可信度评分,简单的高通量分析报告,以及其他信息。PEAKS可以对多个数据库搜索引擎的结果进行比较。PEAKS inChorus会自动将测试结果同其他蛋白质ID搜索引擎(例如Sequest,OMSSA,X!Tandem和Mascot)进行交叉检查,这样可防止肽鉴定结果的假阳性。PEAKS Q是一种用于蛋白质定量的附加工具,支持标记(ICAT, iTRAQ, SILAC, TMT, 018等)和

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过氧化氢灭菌与传统灭菌对比详解

当前市场上的常规灭菌方法主要包括臭氧微醇灭菌,紫外线辐射灭菌,甲醛灭菌和当前出现的过氧化氢灭菌。上述杀菌方法在各种场合都有使用,但是传统的细菌方法在实际应用中存在致命的缺点。 为了克服传统灭菌方法所带来的问题:灭菌效果差,对设备的腐蚀性高以及对人体的危害等,双氧水空间灭菌系列设备应运而生。 过氧化氢,一种有效的消毒剂 首先,过氧化氢(H2O2)是一种天然存在的化学物质,广泛存在于空气和水中。早在 18 世纪,人类就发现并开始使用过氧化氢,该过氧化氢被广泛用于食品,饮料,医疗设备和医疗保健中。过氧化氢的使用主要取决于氧化程度,并且不同浓度​​的过氧化氢具有不同的用途。 普通医用过氧化氢(俗称过氧化氢)的浓度为 3%,主要用于消毒伤口或中耳炎。如果在皮肤,口腔和粘膜上有伤口,脓液或污垢,则会立即分解成氧气。氧不与氧分子结合,具有很强的氧化能力。当它与细菌接触时,它可以消灭细菌并杀死它们。杀死细菌后残留的物质是水和氧气,没有任何毒性或刺激性。不会产生二次污染和耐药性。因此,医用过氧化氢是理想的伤口消毒剂。 工业过氧化氢的浓度通常为 25-50%。高浓度过氧化氢具有高腐蚀性,并具有爆炸危险。如

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MCD饲料诱导大/小鼠NASH模型的对比研究

非酒精脂肪性肝炎(NASH)是一种无过量饮酒,以肝脏细胞脂肪变性、气球样变、弥散性肝小叶炎症为主要临床病理特征的综合征。它是非酒精脂肪性肝病(NAFLD)发展为肝硬化和肝癌的一个重要阶段。据报道 NAFLD 在发达国家的发病率表现为成人 30%、儿童 13%,其中大约有 10% 的 NAFLD 患者发展成为 NASH,而 NASH 患者中的 10% 会发展成为肝硬化,甚至肝癌。非酒精脂肪性肝炎已经成为研究的焦点,然而 NASH 的发病机制尚未明确,研究发现其与胰岛素抵抗、氧化应激、瘦素、Kupffer 细胞等多种因素相关。目前临床上的药物普遍存在毒副作用较大、价格昂贵等问题,而被证实的有效且无副作用治疗方法仅有适当的渐进性减肥运动这一项。 因此探索新型无毒副作用药物对其 NASH 临床治疗具有重要意义,而可靠的动物模型对探索 NASH 的发病机制及防治发挥着关键性作用。目前国内外的NASH模型主要包括3类:① 营养失调性脂肪肝动物模型,它包括了高脂饮食脂肪肝动物模型、高糖饮食脂肪肝动物模型和蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)脂肪肝动物模型。② 复合因素诱导的 NASH 模型,主要是以高脂肪饲料加

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钙成像、电压成像及神经递质探针原理介绍

成像技术(Imaging)一、钙离子成像技术(Calcium imaging)钙离子成像技术(Calcium imaging)是指利用钙离子指示剂监测组织内钙离子浓度的方法。在神经系统研究中,我们常用钙离子成像技术监测神经元内钙离子的变化,提示神经元活动。有了钙成像技术,原本悄无声息的电生理活动就变成了一幅形象地、斑斓闪烁的壮观影像,研究人员可以同时大量追踪神经元活动,研究其关系,因而被全世界神经科学家们追捧。1)钙离子成像技术原理在生物体内,钙离子是细胞信号产生的基础,在很多功能方面有重要作用。在哺乳动物的神经系统中,钙离子是一类重要的神经元胞内信号分子,神经元静息状态下,胞内钙离子浓度约为50-100nM,而当神经元活动的时候,胞内钙离子浓度能上升10-100倍,而钙离子对于突触囊泡释放必不可少;神经元在放电的时候会爆发出一个短暂的钙离子浓度高峰,这意味着神经元钙离子浓度表征突触传递和神经元活动。神经元钙离子浓度表征突触传递和神经元活动示意图因而,神经元钙离子成像技术的原理就是借助钙离子浓度与神经元活动之间的严格对应关系,利用特殊的荧光染料或者蛋白质荧光探针(钙离子指示剂,Calc

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妙用病毒载体开展环路示踪工作

神经元之间的环路连接非常复杂,完整而准确地显示这些环路的结构和变化,对揭示许多疾病的病因和新治疗方法的开发具有非常重要的意义。传统的神经示踪方法如电镜、Golgi染色、染料、肽类标记物等可以显示神经元的形态和投射,少数示踪剂如WGA、TTC等还可以实现跨突触标记,但这些方法都具有信号间接、方向不特异、跨突触后信号衰减严重等缺点,最重要的是,这些染料无法携带基因,因此只能显色。自20世纪80年代,Kristensson首次应用单纯疱疹病毒(HSV)跨突触标记神经元后,各种各样病毒载体在环路示踪方面的应用越来越受到重视。但需要注意的是,虽然这类嗜神经病毒对于神经环路的标记具有很强的感染性和特异性,但其免疫原性很强,动物往往在注射后数天死亡,无法进行行为测试或者生理研究,目前更适用于寻找未知的神经环路,此外此类病毒需要PII以上等级的实验室。因此,越来越多的研究使用AAV进行环路示踪标记。由于AAV本身无复制能力,且其免疫原性极低,因而其不会造成大量的毒害,亦不会影响动物的正常生理,故AAV成为最常用的环路示踪工具病毒载体。神经元是具有极性的细胞,信息从上一级神经元的轴突通过突触传递到下一级

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基于病毒载体的不同基因调控方式的原理和选择

1. 病毒载体可以进行哪些方面的基因操作?基因功能研究主要涉及功能获得和功能缺失,功能获得主要包括外源的过表达,内源性激活,功能缺失主要包括基因干扰和敲除等。借助病毒载体可以进行基因过表达、干扰、敲除和内源性激活等操作,其中基因包括编码基因和非编码基因。2 不同基因调控方式的原理外源过表达:基因功能研究中通常需要上调目的基因的表达来观察表型的变化。过表达是将目的基因在宿主细胞大量表达的过程,其基本原理是将目的基因构建到工具载体上,导入细胞使基因实现大量转录和翻译,从而实现基因产物的过表达。使用病毒载体进行基因的过表达操作是一项成熟的技术,研究者仅需根据实验需求选择合适的启动子、荧光、标签和抗性构建合适的载体,包装成病毒,感染细胞,即可实现基因过表达操作。注:进行基因过表达前,首先需要对目的细胞进行本底表达检测,本底表达低,可以进行过表达操作,如果本底表达过高则考虑换同种其它细胞或进行基因干扰操作。 基因干扰:RNA干扰(RNAi)是正常生物体内抑制特定基因表达的一种现象,当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA(dsRNA)时,该mRNA发生降解而导致基因表达沉默的现象。外源

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老师说「原红与早幼红」就像小李子 20 年变化那么大!为啥我看不出来?

晃晃悠悠,规培轮转到了细胞室,显微镜、骨髓片、认细胞, 时隔多年,又一次落入细胞的魔掌之中,我认了——但就是,真的认不准。在细胞室我感受到了一种诸事不顺畅的感觉。1.显微镜镜下的方向和实际的方向是反的,对于我这样一个连左右都要思考那么片刻的马路杀手来说,要以一定的顺序来阅片,计数分类 200 个有核细胞,简直太难了。血涂片阅片顺序结果就是看着看着,就不记得这个片该怎么移动了,顺序乱了,脑子懵了,再来一次。除了方向的困难,还有双眼看显微镜这个技能, 已「熟练掌握」显微镜操作好些年,我依然不确定我是否是用双眼在看显微镜,私下,我经常尝试轮流闭上一只眼,测试自己是否是双眼看显微镜,但是总感觉有一只眼睛,镜下是看不见的,需要移动调整些许才可见视野。且无论我如何调整目镜,结果还是同上。看一段时间显微镜,再抬头看世界,总感觉这个世界黑了几个度,朦胧了好几分。2.细胞分类如果显微镜使用上的困难,克不克服都不影响我认细胞的话,那么认不出大概就是我成为顶尖细胞专家最大的绊脚石了吧。对着一张基本正常的骨髓片辨认了一上午之后,我带着对自身能力的深深怀疑去向细胞室的老师诉说学习上的困难——表示认细胞太难了。

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正常人尿液蛋白质组学研究

尿液是血液经肾小球滤过、肾小管和集合管重吸收、排泄及分泌产生的终末代谢产物,其组成、数量与性状的变化携带有泌尿系统疾病发生、发展及预后的各种信息,也可反应机体整体代谢状态,与血清等其它体液样本相比,其获取无创、收集便利,并且蛋白组成相对简单、易于分析。长期以来, 肾脏病及其他泌尿系统疾病的诊断和治疗研究进展缓慢, 鉴别诊断通常只能依靠细微的组织病理学改变, 使得早期诊断、预后追踪以及疗效观察都十分困难. 尿蛋白质组可以为疾病诊断、治疗、监测和预后研究指明新的方向。尿液蛋白质组学研究路线尿液蛋白质组学分析方法样品处理:收集晨起清洁中段尿100ml,2h内4摄氏度1500r/min离心15min,收集上清液,弃去细胞碎片和核,上清液在血细胞计数板观察无细胞或颗粒,去上清液与-20摄氏度预冷纯丙酮1:1混匀,4摄氏度静置15min,12000r/min离心5min,弃上清,将沉淀溶于样品裂解液中,超声10Hz/10s冷却50s重复6次,4摄氏度12000r/min离心10min,去上清,过除盐柱除盐,蛋白质干粉溶于裂解液中,检测总蛋白浓度。分装,-80摄氏度冻存备用。酶切和同位素标记:将蛋白

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性激素六项这么看,简单明了!

性激素六项检测,是内分泌激素系统检查。但这六项都包含什么?分别有什么意义?什么时候检查合适?大多数人都说不清楚,今天我们来详细介绍一下。 性激素六项是女性的基础检查。检查基础性激素前至少一个月不能用性激素类药物,包括黄体酮、雌激素类,否则结果不可靠。当然,治疗后需要复查性激素的除外。 检查性激素可以在月经的任何时间,每个时段的正常值不同。 什么是基础性激素水平? 但是诊治不孕症一定要先了解基础性激素水平,所以要选择月经周期的第 2~5 天检查,称为基础性激素水平,第 3 天测定专业。确定是来月经第 3 天,检查性激素 5 项即可,可以不查孕酮,孕酮应该在黄体期检查(月经 21 天或排卵后 7 天);但不能肯定阴道流血是否月经,应该检查 6 项,以防止误诊(根据 P 数据可以大概判断月经周期时段)。 月经稀发及闭经者,如尿妊娠试验阴性、阴道 B 超检查双侧卵巢无≥10mm 卵泡,EM 厚度﹤5mm,也可做为基础状态。 基础性激素化验单应该这样看:基础 LH 和 FSH 正常值为 5~10IU/L,基础 E2 正常值为 25~50pg/ml(这 3 项结果不能看化验单上的参考值,要按这个

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Edman降解的具体步骤

Edman降解是蛋白质测序中一个非常重要的反应步骤,因为通过该反应可以对蛋白质有序的氨基酸组成进行分析。自动化Edman测序仪现在已得到广泛使用,他们能够对长约50个氨基酸的肽进行测序。以下概括了使用Edman降解进行蛋白质测序的步骤,随后还将对其中一些重要步骤做详细说明。1. 用2-巯基乙醇等还原剂破坏蛋白质中的任意二硫键,过程中可能需要一个保护基团(例如碘乙酸)以防止化学键重新形成;2. 果蛋白质不止一个,则需要分离并纯化蛋白质混合物中的各条肽链;3. 确定每条链中的氨基酸组成;4. 确定每条链末端的氨基酸;5. 将每条链断裂成50个氨基酸以下的片段;6. 分离并纯化肽片段;7. 确定每个肽片段的序列;8. 使用其他裂解方式重复以上步骤;9. 构建整条蛋白质序列。Edman测序实验流程图(来源:百泰派克)蛋白质裂解成肽片段的过程长度超过50-70个氨基酸的肽不能通过Edman降解来进行蛋白质测序。因此,需要将长蛋白链裂解成小片段,然后再进行单独测序。裂解过程可以通过内肽酶(例如胰蛋白酶或胃蛋白酶)进行,也可以通过化学试剂(例如溴化氰)进行。不同的酶具有不同的切割模式,片段之间的重叠

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从冻存的全血样本中快速分离出基因组 DNA

【样品】冻存的全血样本【样品准备】将冻存的血液样品充分融化后混匀。【操作步骤】1.活化硅胶膜将吸附柱放入收集管中,加入250 ul Buffer BL,12,000 g离心1 min,活化硅胶膜。2.样品消化(1)取20 ul Proteinase K至1.5 ml离心管底部,然后加入200 ul充分混匀的全血样品,涡旋振荡10 s。(2)加入200 ul Buffer gA1,旋涡振荡10 s,70℃孵育1 h,期间震荡1 ~ 2次。3.孵育结束后加入200 ul无水乙醇,涡旋振荡混匀。4.将步骤3所得溶液全部转入吸附柱中,12,000 g离心1 min,弃废液。5.向吸附柱中加入500 ul Buffer PW,12,000 g离心30 s,弃废液。6.重复步骤5一次。7.向吸附柱中加入500ul Wash Buffer,12,000g离心30 s,弃废液。8.将吸附柱放回收集管中,12,000g离心2 min,开盖晾干1 min。9.取出吸附柱,放入一个干净的1.5 ml离心管中,在吸附膜的中央处加50 ul TE Buffer,室温放置2 min,12,000 g离心2 min

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慢病毒载体基础知识及应用

1.慢病毒载体概述慢病毒载体(Lentivirus)是一类改造自人免疫缺陷病毒(HIV)的病毒载体,是逆转录病毒的一种,基因组是RNA,其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代,属于假型病毒。可利用逆转录酶将外源基因整合到基因组中实现稳定表达,具有感染分裂期与非分裂期细胞的特性。慢病毒基因组进入细胞后,在细胞浆中反转录为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录成mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白;或产生小RNA。慢病毒介导的基因表达或小RNA干扰作用持续且稳定,并随细胞基因组的分裂而分裂(图1)。 图1 慢病毒作用机制慢病毒载体具有宿主范围广,免疫原性低,基因容量大,可以长期表达等特点。能够有效地感染培养的肿瘤细胞、肝细胞、心肌细胞、神经元、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞。慢病毒的感染具有整合特性,能够将外源基因有效地整合到宿主染色体上,达到持久性表达,因而可构建稳转细胞株,用于基因的细胞功能研究。使用慢病毒载体改造T细胞可用于CAR-T细胞治疗,CRISPR/Cas9文库构建使用的也是慢病毒载体。2.慢病毒包装与纯化慢病毒包

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有效性超90%的新冠疫苗,“低温”是关键

在过去这一周,关于疫苗的好消息源源不断。继美国辉瑞发布疫苗的新进展之后,国药集团和Moderna Therapeutics也传来了好消息。国药集团中国生物研制的全球首只新冠灭活疫苗,三期临床试验已经接近尾声。从各项数据来看,无论是国药集团的灭活疫苗,还是辉瑞和Moderna的mRNA疫苗目前呈现的试验结果都好于预期,持续地给这个病毒肆虐的世界带来希望。在疫苗研发往前推进的同时,防疫专家也在同步探讨几个关键问题:疫苗研发出来之后,谁先接种?疫苗研发出来之后,现有的冷链配送和存储体系能否满足疫苗质量安全的最基本需求。保持疫苗的低温是成功的关键过去十年中出现了多种新型的疫苗,例如腺病毒疫苗,重组蛋白疫苗等,许多国家在大规模物流和疫苗储存方面获得了宝贵的经验: 从制造商那里运输疫苗,将它们储存在中心地点,然后通过冷藏车在城镇和乡镇之间配发,并对疫苗冷链运输和储存的温度进行实时监控和记录。然而在新冠疫情爆发的今天,无论是使用现有的冷藏冷链设施,还是满足新型疫苗的冷链和储存,都不是一件轻松的事。今年早些时候,德国物流公司DHL估计,有30亿人无法获得供应疫苗所需的冷链资源。被寄予厚望的新型mRNA

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