一、沙门氏菌病本病是一种人畜共患病，是所有普通级实验动物应排除的一种疾病。（1） 病原体沙门氏菌（salmonella sp），为革兰氏阴性的短杆菌，无芽孢、鞭毛。此菌抵抗力弱，60℃以上和一些常规消毒药就可将其杀死，但在饮水、土壤和粪便中可存活数月。（2） 流行病学传染源为患病和病死的动物。人和各类实验动物均可感染，人感染后发生肠道疾病,呈食物中毒症状。本病可水平传播，如通过接触病死或带菌的动物以及被污染的饲料饮水而发病，苍蝇和野鼠是重要的传播媒介。（3） 临床症状急性呈暴发型，看不到任何临床症状动物就大批死亡，往往是下班时一切正常，第二天上班发现动物已有1/3死亡。亚急性表现为病鼠食欲、饮欲减退甚至废绝，被毛蓬乱无光泽，眼结膜发炎、眼睑粘合；腹泻，粪便呈泡沫状粘液、黄绿色、味恶臭,严重时粪便中带有血丝，通常可见病鼠腹部膨大，手弹可听到明显的鼓音，一般病程二、三周。慢性的有上述症状，但症状较轻，患鼠逐渐消瘦，二、三周后逐渐恢复。（4） 诊断根据临床症状和尸体剖检作初步诊断，确诊须作细菌学检查。（5） 防治加强饲料、饮水、笼具、垫料的消毒，严防野鼠、苍蝇污染饲料、饮水。 饲养室定期消毒

随着微生态学理论研究的不断深入。微生态制剂（或称微生态调节剂microeclogial modulator）也随之迅速地发展起来。从本世纪初梅切尼科夫（Elie metchnikoff）在欧洲提倡饮用酸牛奶可健康长寿以来，微生态制剂亦从此而风行于世界各地。70年代德国Volkor rusch在赫尔本建立了微生态学研究所，并从事对双歧杆菌、乳杆菌、大肠杆菌等活菌作生态疗法的研究与应用。日本微生态制剂发展较快。80年代初已有26种微生态制品用于医疗和保健。其他各国亦多种微生态制品投放市场，而且数量和品种亦在不断扩大。我国最早使用微生态制剂乳酶生（表飞鸣）来治疗肠道疾患。80年代初大连医科大学康白教授首先研制成功促菌生（蜡杆芽胞杆菌）以来，事后各种活菌微生态制剂相继研制成功。并陆续投放市场，这些微生态制剂一问世，便受到了人们的普遍关注和欢迎，并以惊人的速度、良好的效果被更多人群所接受。其主要原因是因为该制剂能纠正微生态失调，调节人体微生态平衡，起到有病辅治、未病防病、无病保健的主要作用〔1～3〕。 　　1　微生态制剂的定义和类型〔3～5〕 　　微生态制剂是在微生态学理论的指导

一、仪器特点1、仪器采用高性能集成电路组成性能稳定的正弦波发生器，因此显示稳定、漂移小；2、仪器采用了相敏检波器，抑制了由电极引线分布电容对测量的影响，因而本仪器不用电容补偿调节器，换档自动补偿并能测量低电导值；3、仪器信号源频率和量程同步切换，使用方便；4、仪器可在全量程范围内直读电导，只需校正一次电极常数，使用极为方便；5、仪器内装有热反馈电路和驱湿元件，仪器使用不受温度和湿度影响；6、仪器有温度补偿器，DDS-11C型对被测液能作标准温度系数百分之二，DDS-307型作百分之一至百分之四补偿。二、仪器的使用1、将电源插头插入接地可靠的插座；2、将选择开关置于校正位置，开机预热10～15分钟；3、电导的测量：（1）仪器在全量程范围内测量，只须在第三量程或任用量程校正电极常数，有效读数最多为宜。（2）温度补偿器置25℃，标准电导的温度值。（3）DDS-307型电极选择开关置1或0.1等相应档位。选择开关置于校正位置，调节常数调节器，使仪器显示所用电极的电极常数值。例：电极的常数为0.87则调常数调节器，使仪器显示为0.870（870）。（4）将电极插头插入插口，再将电极浸入待测溶液中

相关专题 Western Blot技术专题 LOWRY法蛋白定量专题 A. Folin-phenol(lowry method)定量法 此法以Biuret方法反应为基础发展而起，因此会严重干扰Biuret测定方法的因子都会影响此测定法的准确度。这些干扰因子包括：含-CS-NH2，-CH2-NH2，-CRH-NH2，-CH2-NH-CHNH2-CH2OH，-CHOH-CH2NH2等基团的物质以及缓冲剂如Tris、蔗糖、低浓度的酚类、柠檬酸等，但低浓度的尿素、硫酸胺可以增加碳酸钠-氢氧化钠的浓度来校正显色结果。1951年Lowry对于 Folin-Ciocalteu 试剂在不同的 pH值条件下得到此试剂作用的最佳反应条件，此法的灵敏度较Biuret方法高约100倍，反应时间只要约15分钟即可显色，颜色的稳定度可达数小时，故目前多用Folin-phenol法测定待测样本的蛋白质浓度。 原理：蛋白质与Folin试剂作用分成两个阶段： 1.蛋白质 先与碱性铜离子作用 Cu2+ + Protein- Cu-Protein

化学合成方法与生物化学方法之间有着显著的差别，材料和方法上非常小的改变常常会在所获得的产物以及保证可靠的合成路线之间造成差别。下面介绍几个最可能引起故障的经验问题。1．溶剂大多数用在化学合成中的商品试剂都不够纯。因此使用前应该进行纯化（常用方法：蒸馏）。对于“专为合成DNA纯度”的溶剂也要检查其颜色（几乎所有的液体都是无色的）及透明度（颗粒将阻塞多孔玻璃，分子筛尘埃将造成合成失败）。大多数有关的杂质是水、酸、碱和金属离子。水：对吸收水的化学试剂蒸馏一次，大多数溶剂的水分将会减少到10btg/g或更少。因为在偶联步骤中允许少量水的存在，故这种水分含量的溶剂可用于合成。许多溶剂都是吸潮的，因此所有溶剂的容器都应该塞紧，只能短时打开，通常没有必要在氩气中储存。酸和碱：氯化的碳氢化合物常含有微量盐酸，在合成期间会使二甲氧基三苯甲基损失。通过下列方法可以进行检测：在5ml溶剂中溶解lmg的5，-O-二甲氧基三苯甲基脱氧核糖核苷酸衍生物，测定495nm处的吸收值，应该没有吸收。极性溶剂中的一级和二级氨能切断寡核苷酸与载体之间的键，可以用茚三酮试验检测。金属离子：虽然溶剂中没有这一问题，但作为干燥剂

分子量测定的实验方法与强兵利器 一、实验目的 1. 了解凝胶层析的原理及其应用。 2. 通过测定蛋白质分子量的训练，初步掌握凝胶层析技术 。 二、实验原理 凝胶层析又称排阻层析，凝胶过滤，渗透层析或分子筛层析等。它广泛地应用于分离、提纯、浓缩生物大分子及脱盐、去热源等，而测定蛋白质的分子量也是它的重要应用之一。凝胶是一种具有立体网状结构且呈多孔的不溶性珠状颗粒物质。用它来分离物质，主要是根据多孔凝胶对不同半径的蛋白质分子（近于球形）具有不同的排阻效应实现的。亦即它是根据分子大小这一物理性质进行分离纯化的。对于某种型号的凝胶，一些大分子不能进入凝胶颗粒内部而完全被排阻在外，只能沿着颗粒间的缝隙流出柱外；而一些小分子 不被排阻，可自由扩散，渗透进入凝胶内部的筛孔，尔后又被流出的洗脱液带走。分子越小，进入凝胶内部越深，所走的路程越多，故小分子最后流出柱外，而大分子先从柱中流出。一些中等大小的分子介于大分子与小分子之间，只能进入一部分凝胶较大的孔隙，亦即部分排阻，因此这些分子从柱中流出的顺序也介于大、小分子之间。这样样品经过凝胶层析后，分子便按照从大到小的顺序依次

用以检测T2DM的众多候选基因突变所需要的技术，既要求能够自动化、高通量进行，也要求除PCR之外，勿需进行PCR引物修饰、购买特殊试剂、检测标记信号或作其它的样品处理；而目前已有的许多DNA突变分析技术诸如单链构象多态性 (single-strand conformation polymorphism，SSCP) 、变性梯度凝胶电泳法(denaturing gradient gel electrophoresis，DGGE)等均不能满足此要求。近年来建立并迅速发展的DHPLC是一种新型基因突变筛查技术，符合上述的要求，可用于单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)，小片段缺失或插入等多种基因突变的检测。DHPLC具有高通量检测、自动化程度高、灵敏度和特异性较高、检测DNA片段和长度变动范围广、相对价廉等优点。与传统的SSCP 、DGGE等方法相比，DHPLC有较多的优点。SSCP的结果受血样质量、提取方法等因素的影响，并且需要跑胶、电泳；DGGE则需要标记引物，存在放射性污染，这两种方法都比较费时费力。而DHPLC则高度自动化，可以自动取

取人或动物体内（或胚胎）的组织，将其剪碎至1mm3的组织块，再采用的如下方法进行分离培养：一、悬浮细胞的分离方法 1、将血液、羊水、胸水或腹水等悬液直接转至离心管中，1000rpm/分钟离心5分钟。2、去掉上清，离心沉淀用无钙、镁的PBS清洗后1000rpm/分钟离心5分钟。此步重复两次。3、用培养基重悬，调整适当细胞浓度后分瓶培养。4、如选用悬液中某种细胞，可采用离心后的细胞分层液收获目的细胞。二、实体组织材料的分离方法 （一）机械分散法1、纤维成分很少的脑组织，部分胚胎组织，用剪刀剪碎至1mm3 的组织块。2、用PBS清洗两次后①用吸管吹打，分散组织细胞。②或将已充分剪碎分散的组织放在注射器内（用九号针），使细胞通过针头压出。③或在不锈钢纱网内用钝物（注射器钝端）压挤使细胞从网孔中压挤出。3、收集细胞转入离心管中，1000rpm/分钟离心5分钟。4、去上清，加入含血清的培养基，重悬后移至培养瓶中培养。（二）消化分离法1、酶消化分离法（过夜冷消化法）①细胞间质较少的软组织，如肝、肾、甲状腺、羊膜、胚胎组织、上皮组织等，用Hanks液清洗组织三次，剪成碎块大小为4毫米左右。②再用Han

细胞和病毒生产的放大培养面临挑战。当需要生产量增加千倍时，细胞培养瓶对于工业规模生产是不可行的。微载体为生物反应器中贴壁细胞的生长提供了方便， 微载体充当贴壁细胞可附着的支架，允许它们增殖，而生物反应器使细胞-微载体复合体自由悬浮在培养基中。因此，贴壁细胞也可以像悬浮细胞那样生长，从而简化了放大培养，并允许利用现有的资源用于过程优化和生产。微载体细胞计数的难题 细胞计数和活力是优化和监测大规模生物生产的关键参数。传统方法的微载体的细胞计数耗时耗力，且计数结果不准确，需要离心样品、PBS 重悬、胰蛋白酶消化细胞和台盼蓝或者结晶紫染色等多个步骤来计数在微载体上生长的细胞。细胞计数影响因素：步骤多，消耗时间长细胞结团问题胰酶消化不完全细胞释放不完全微载体干扰细胞计数结果NucleoCounting 提供微载体细胞计数难题解决方案Nucleocounting 是一种微载体细胞计数和活力分析的精确可靠的方法。Nucleocounting 方法通过荧光染色细胞核的方法检测细胞，这些细胞用荧光染料 DAPI 进行标记，DAPI 高度特异结合 DNA，即使在有细胞碎片的情况下，也能精确检测细胞核。通过

MIRNA(microRNA)检测实验流程(加polyA法)一：概述microRNA(miRNA)是一类有大约22个核苷酸组成的非编码小分子RNA，其广泛存在于真核生物中。miRNA在个体发育的不同时期及不同组织中有不同的表达模式，都表明了其在发育和分化中起有重大的调控作用。迄今为此，对miRNA的检测方法主要有Northern Blot 等基于分子杂交的方法，这些方法敏感度低、耗时长、RNA的用量较大。miRNA qPCR Detection Kit采用了国际上公认的核酸检测标准技术――Real-Time PCR技术来对miRNA进行检测，其具有快速、特异性强、灵敏度高等优点。以下主要是以miRNA qPCR Detection Kit来对miRNA进行检测的实验操作流程：二：背景资料检测人脑组织中miRNA的表达。所选的miRNA及其扩增长度信息如下：　 Primer ID Mature_Acc Mature_ID PCR_SIZE1 hsmq-0031_01 MIMAT0000069 has-miR-16 752 hsmq-0032_01 MIMAT0

聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是体外酶促合成特异 DNA 片段的一种技术。利用PCR技术可在数小时之内大量扩增目的基因或DNA 片段，从而免除基因重组和分子等一系列繁琐操作。由于这种方法操作简单、实用性强、灵敏度高并可自动化，因而在分子生物学、基因工程研究以及对遗传病、传染病和恶性肿瘤等基因诊断和研究中得到广泛应用。PCR进行的基本条件是： （1）以 DNA 为模板（在RT－PCR中模板是RNA ）；（2）以寡核苷酸为引物；（3）需要4种dNTP作为底物；（4）有 Taq DNA 聚合酶。PCR每一个循环由三个步骤组成： （1）变性加热模板DNA ，使其解离成单链；（2）退火降低温度，使人工合成的寡聚核苷酸引物在低温条件下与模板DNA 所需扩增序列结合；（3）延伸在适宜温度下，Taq DNA 聚合酶利用dNTP使引物端向前延伸，合成与模板碱基序列完全互补的DNA 链。每一个循环产物可作为下一个循环的模板，因此通过35个循环后，目标DNA 片段可能性扩增可达235 倍。PCR的影响因素： （1）模板 单、双链DNA 或RNA 都可作为PCR的模

恶性肿瘤可通过多种途径导致血栓发生，影响肿瘤患者的生活质量和预后，血栓的形成又可以早期预示着肿瘤的发生，所以恶性肿瘤与血栓的相互关系越来越受到重视。恰当的预防血栓治疗不仅可减少并发症的发生，还可以改善肿瘤患者的预后。 多种因素可以影响VTE发生，包括患者的年龄、既往是否患过VTE；肿瘤大小、肿瘤分期、手术切缘情况、血凝系统状况；治疗方式，如手术、放疗、化疗、激素治疗等。肿瘤本身会增加DVT和PE的风险，并且成为围手术期动静脉血栓形成的独立危险因素。肿瘤患者比非肿瘤患者发生VTE的概率高4～7倍。VTE是预示肿瘤患者1年内死亡的重要预后因素，合并VTE的肿瘤患者只有12％生存期能达到1年。 VTE也可预示肿瘤的发生。一些特发性的血栓性疾病在6一12个月内多数能发现肿瘤。特发性VTE发生恶性肿瘤的发病率约为6．1％，继发性VTE发生恶性肿瘤的发病率约为2．3％，因此特发性VTE患者常存在隐匿性恶性肿瘤的可能。VTE患者中恶性肿瘤的发生率是普通人群的1．5～3．2倍。 肿瘤患者高发血栓的机制可归纳为以下几点： 1、肿瘤侵袭造成的血管壁异常 血管内皮细胞损伤、

移液器的操作规范1 设定移液体积从大体积调节到小体积时，为正常调节方法，逆时针旋转刻度即可；从小体积调节至大体积时，可先顺时针调至超过设定体积的刻度，再回调至设定体积，这样可以保证最佳的精确度。2 装配移液器吸头单道移液器，将移液端垂直插入吸头，左右微微转动，上紧即可；用移液器反复撞击吸头来上紧的方法是不可取的，这样操作会导致移液器部件因强烈撞击而松散，严重的情况会导致调节刻度的旋钮卡住。多道移液器，将移液器的第一道对准第一个吸头，倾斜插入，前后稍许摇动上紧，吸头插入后略超过O型环即可。移液器的养护1、如液体不小心进入活塞室应及时清除污染物；2、移液器使用完毕后，把移液器量程调至最大值，且将移液器垂直放置在移液器架上；3、根据使用频率所有的移液器应定期用肥皂水清洗或用60%的异丙醇消毒，再用双蒸水清洗并晾干；4、避免放在温度较高处以防变形致漏液或不准；5、发现问题及时找专业人员处理。移液器的注意事项1、当移液器吸嘴有液体时切勿将移液器水平或倒置放置，以防液体流入活塞室腐蚀移液器活塞；2、正确使用移液器吸液、排液，以达高精准度。尤其注意排液的2) 、3) 操作；3、平时检查是否漏液的方法

应用酶标抗体进行免疫测定的方法较多，非均相酶免疫测定是目前应用最广泛的一类酶免疫检测技术，其中以酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）最常用，它可用于测定抗体，也可测定可溶性抗原及细胞抗原。而酶-抗酶复合物多用于免疫组织化学。以下着重介绍ELISA（包括双抗体夹心法、细胞ELISA和斑点ELISA）和免疫酶组化技术（APAAP法）。 基本原理：先将以知的抗体或抗原结合在某种固相载体上，并保持其免疫活性。测定时，将待检标本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应，再用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离成分，然后加入酶的作用底物催化显色，进行定性或定量。 细胞ELISA：该方法将细胞视为固相载体。多用于检测细胞表面的抗原或受体或筛选细胞表面抗原的特异性抗体。 试剂及配制 1. 洗涤液（pH 7.4 PBS) KH2PO4 0.2g Na2 HPO4--12H2 O 2.9g NaCl 8.0g KCl

摘要：对第一向为载体两性电解质pH梯度等电聚焦双向电泳（ISO-DALT）中若干影响分离效果的实验条件进行了研究。结果发现，琼脂糖和尿素的纯度明显影响分离效果；加丙烯酰胺或碘乙酰胺保护经二硫苏糖醇还原的样品中的巯基，可以显著减少假斑点；厚度较薄的分离胶的分离效果较好；以琼脂糖为两性电解质载体代替聚丙烯酰胺的第一向等电聚焦电泳使分子量105Da以上蛋白质得以分离。双向电泳方法按第一向等电聚焦的不同，可以分为载体两性电解质pH梯度双向电泳和固相pH梯度双向电泳。目前，载体两性电解质pH梯度双向电泳方法由于蛋白溶解性低、重现性低、蛋白上样量低，使其应用受到限制。但固相pH梯度双向电泳方法存在着固相胶条昂贵，固相pH梯度灌胶技术复杂，并且只能用聚丙烯酰胺做载体，不能分离分子量大于105Da的蛋白质等问题。因此，第一向为载体两性电解质pH梯度等电聚焦（ISO-DALT）的双向电泳方法仍有其存在的合理性和改进的必要性。对蛋白质双向电泳双胺染色法的研究发现，含有Na2S2O3非双胺染液染色后胶表面背景深，呈褐黄色，影响蛋白质点检测，特别影响低表达蛋白质点检测。不含Na2S2O3 双胺染液染色胶表面无

在新型免疫诊断产品的开发阶段，为保持蛋白质试剂在干燥和溶解状态下稳定而进行的实验至关重要。对于IVD厂家来说，保持产品的质量和可信度是至关重要的。为确保他们生产出高质量的产品，公司实行严格的质量保证体系， 关键步骤符合国际质量体系标准，如原材料采购、生产、软件验证。 另一个同样重要的任务是确保在产品生产出来后一段长时间内，最终用户都能享受到高质量产品。公司为保证产品质量，在运输、仓储和产品使用过程中选择了合适的包装材料和方法。干燥管和干燥塞给体外诊断试纸提供了理想的湿度环境和产品保护。在早期研发过程中，IVD产品生产商应当考虑试用不同干燥剂型来保证产品的完整性和稳定产品质量。包装为IVD制造商提供四个方面作用:保护(例如湿度、光、机械稳定性)、分装、安全性(幼儿防护、明显损害)和信息标识。 虽然这篇文章主要描述干燥剂作为包装防护系统的组成部分，但也提到了不同包装方法的其他功能比较。潮湿的危害水分对IVD产品损害是多方面的，主要是减少保质期和质量。 例如，实验表明水分对金标快速测试的可靠性有负面影响。除了破坏标记和通过液化抗体使捕获抗体失活外，储存期间过量水分可能导致糖结晶的产生，同时造

血管新生（angiogenesis）是一个受严格调控的多步骤过程，导致从已存在的脉管系统形成新的血管，对肿瘤的生长及转移，均是必需的。通过抑制新血管生成，中断肿瘤的营养供给，达到治疗目的，它代表了近年来一种治疗肿瘤及其它与病理性血管生成有关的人类疾病的新策略。血管内皮生长因子（VEGF）作为内皮细胞特异性的促分裂原是其重要的正调节因子，其生物活性被两种高亲和力的酪氨酸激酶受体，即Flt-1（VEGF1）和KDR（VEGFR2）所介导。临床上包括实体瘤和血液系统肿瘤在内的大多数重要的人类肿瘤均有VEGF及其受体的过高表达。更为可喜的是，与传统治疗相比，VEGF和/或其受体的拮抗剂可能对肿瘤有较高的特异性，减少副作用，因避开肿瘤细胞耐药机制切断肿瘤细胞的血液供应会降低耐药的发生。近年来的研究表明，KDR/Flk-1受体由于数目少，表达于细胞表面等特点而更适于作为抑制血管新生的靶点。目前，至少三种抗体作为抗血管新生治疗剂正处于积极地研究中，其中两个正进行临床试验以评价其抗肿瘤能力。RhuMAB VEGF是一种人源化的抗VEGF抗体正处于II/III期临床试验用于治疗肺癌、乳腺癌、前列腺癌和直

动物实验过程中，可因麻醉药过量、出血过多、分泌物或血块堵塞气管造成窒息以及某种药物原因引起动物血压、呼吸不规则等现象，此时应立即进行急救处理措施。急救处理措施首先要迅速排查原因，并中断诱因（如止血、停药、排除分泌物等），然后对症实施急救措施。一、呼吸、心跳（血压）的改变动物实验过程中，需密切观察实验动物的呼吸、心跳及血压的变化，一者它们是实验反应的数据指标；二者是实验动物状态的主要指征，尤其对呼吸的观察，因为动物的死亡首先是呼吸的停止。（一）诱发原因1、麻醉给药速度过快或过量实施静脉给药麻醉，可因给药速度过快或过量导致呼吸停止。因此，为防止麻醉剂过量，注射速度一定不要过快，严密观察动物状况，若需追加麻醉剂，一次不宜超过总量的1/5。2、气道不畅或堵塞常见于麻醉后，因为气管分泌物增多或气管切口的出血凝块堵塞气管，动物呼吸不规则、呼吸困难甚至引起的窒息。3、大失血如因大动脉插管的松脱所造成的大失血。4、实验药物的作用如静脉注射乙酰胆碱过量或动物对其反应过强，引起心搏减弱减慢，继而出现呼吸、心跳的停止。（二）急救措施1、迅速排查、中断、排除诱因。如应用棉签清除干净气管、气管插管内的分泌物及血

一、人体安静时心电图的描记 【 目的 】 能辨认人体体表正常心电图的波形，并了解其生理意义及正常范围。初步学习心电图的记录、测量、分析方法及运动时心电图的描记方法。 【 原理 】 人体是一个导体，心脏位于导体之中。心脏兴奋时，其兴奋的产生、传导及恢复可通过心脏周围的组织和体液传播到体表。利用表面电极从体表不同部位将心肌的电变化引导并放大到心电图机上所记录到的波形，即为心电图。 【对象】人 【 器材与药品 】 心电图机、导电膏、75%酒精棉球。 【 内容 】 （一）人体安静时心电图的描记 1、在心电图机妥善接地后接通电源，预热3-5分钟。 2、正确安放电极，连接导联线。受试者静卧于检查床上，摘下眼镜、手表、手机和其它微型电器，全身肌肉放松。在手腕、足踝和胸前放置引导电极。 一般手腕应在腕关节上方（屈侧）约3cm处，足踝应在小腿上方约3cm处，常用胸部电极的位置

一、碱变性法提取质粒DNA 质粒(Plasmid)是细菌染色体外能自身独立复制的双股环状DNA。带有遗传信息，可赋予细菌某些新的表型。将质粒指纹图谱分析方法、质粒DNA探针技术及检测质粒的PCR技术用于临床感染性疾病的诊断和流行病学调查已成为现实。质粒作为载体在基因工程中起着重要的作用。分离和纯化质粒DNA的方法很多,但这些方法基本包括三个步骤：即细菌的培养和质粒DNA的扩增；细菌菌体的裂解;质粒DNA的提取与纯化。本实验学习用碱变性方法提取质粒DNA 。【原理】细菌培养物加入SDS和NaOH碱性溶液处理后，菌体裂解，可使细菌的质粒DNA、染色体DNA和RNA一起从细胞内释放出来，经琼脂糖凝胶电泳，因各种核酸分子的迁移率不同将上述核酸分成不同的带。用溴化乙锭（EB）染色后，在紫外线灯下可看到各种核酸带发出的荧光。根据荧光的位置，可区分不同的核酸带。【材料】1、菌株E.coliJM109（pUC19），E.coliRRI（pBR322）2、试剂溶液Ⅰ(50mM葡萄糖,25mMTris.HclPH8.0,10mMEDTA) 溶液II(0.2NNaOH，1%SDS)用前新配制